【摘 要】
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目的：揭示目标外泌体lncRNA 在PM2.5 致呼吸系统的DNA 损伤效应中的作用,并初步探讨其分子机制.方法：采用PM2.5 染毒HBE 细胞、将染毒后细胞与正常HBE 细胞共培养以及将染毒后细胞分泌的外泌体和正常HBE 细胞共孵育三种处理方式,通过ELISA 试剂盒、Western blot和碱性彗星实验检测HBE 细胞DNA 损伤情况.并利用高通量测序检测正常细胞和PM2.5染毒细胞外泌体
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院 南京21116 常州市疾病预防控制中心 常州213000
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：揭示目标外泌体lncRNA 在PM2.5 致呼吸系统的DNA 损伤效应中的作用,并初步探讨其分子机制.方法：采用PM2.5 染毒HBE 细胞、将染毒后细胞与正常HBE 细胞共培养以及将染毒后细胞分泌的外泌体和正常HBE 细胞共孵育三种处理方式,通过ELISA 试剂盒、Western blot和碱性彗星实验检测HBE 细胞DNA 损伤情况.并利用高通量测序检测正常细胞和PM2.5染毒细胞外泌体中的全部lncRNAs,结合RT-qPCR 实验筛选并验证目标外泌体lncRNA.干扰HBE 细胞中目标lncRNA 的表达后,通过ELISA 试剂盒、Western blot 以及碱性彗星实验验证目标外泌体lncRNA 在PM2.5 致HBE 细胞DNA 损伤效应中的功能.并设立目标lncRNA 在HBE 细胞中的过表达组以及对照组,通过Illumina Hiseq 测序平台进行mRNA测序,筛选与目标lncRNA 结合的靶蛋白,通过GO 分析和KEGG 通路分析预测目标外泌体lncRNA 在PM2.5 致HBE 细胞DNA 损伤效应中可能的分子机制.结果：在经PM2.5 染毒、共培养以及外泌体共孵育处理后的HBE 细胞中8-OHDG 和γ-H2AX 表达上调,出现细胞拖尾.确定lncRNA AC006547.8 为目标外泌体lncRNA,过表达AC006547.8 可使8-OHDG 和γ-H2AX 表达上调,出现细胞拖尾.PM2.5 染毒HBE 细胞可使细胞中AC006547.8 表达水平显著升高,同时干扰HBE 细胞中AC006547.8 的表达后再孵育与PM2.5 染毒HBE 细胞外泌体,与对照组相比8-OHDG 和γ-H2AX 表达降低,细胞拖尾程度减轻.免疫荧光原位杂交(FISH)结果显示AC006547.8 主要存在于HBE细胞核中.结合mRNA 测序,发现部分可能与AC006547.8 结合的靶蛋白存在与DNA 损伤刺激效应相关的生物学功能,并且可能调控细胞凋亡相关的信号通路.结论：HBE 细胞在受到PM2.5 刺激后分泌的外泌体可作用于正常HBE 细胞,使正常HBE细胞发生DNA 氧化损伤,并进一步导致细胞的DNA 双链断裂,同时PM2.5 致HBE 细胞的DNA 损伤效应是由PM2.5染毒HBE 细胞分泌的外泌体lncRNA AC006547.8 引起的,并且外泌体lncRNA AC006547.8 可能通过与凋亡相关通路上的靶蛋白相结合,从而介导PM2.5 致HBE 细胞的DNA 损伤效应.
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