本试验对鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofihril-bound serine proteinase,MBSP)进行底物特异性研究。通过突变位点设计、重叠延伸PCR等实现鲫鱼MBSP基因的定点突变及重组表达；比较突变酶与野生型MBSP的酶学性质,确定影响MBSP底物特异性的关键氨基酸残基；利用生物信息学手段分析突变前后MBSP底物特异性发生变化的主要原因；最后将突变前后的MBSP与胰蛋白酶共同消化蛋白,进一步验证突变MBSP对底物的选择性切割发生变化。结果显示,重组MBSP(野生型与突变型)于毕赤酵母成功表达；酶学试验结果显示突变MBSP在不改变酶结构的前提下底物特异性发生了变化,并用生物信息学手段得到证实。而且,重组MBSP与胰蛋白酶一样,能水解蛋白产生小肽,因此热稳定性优于胰蛋白酶的重组MBSP有望应用于未来的质谱鉴定。