【摘 要】
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本试验对鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofihril-bound serine proteinase,MBSP)进行底物特异性研究。通过突变位点设计、重叠延伸PCR等实现鲫鱼MBSP基因的定点突变
【机 构】
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集美大学食品与生物工程学院福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室 福建厦门361021
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛
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本试验对鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofihril-bound serine proteinase,MBSP)进行底物特异性研究。通过突变位点设计、重叠延伸PCR等实现鲫鱼MBSP基因的定点突变及重组表达;比较突变酶与野生型MBSP的酶学性质,确定影响MBSP底物特异性的关键氨基酸残基;利用生物信息学手段分析突变前后MBSP底物特异性发生变化的主要原因;最后将突变前后的MBSP与胰蛋白酶共同消化蛋白,进一步验证突变MBSP对底物的选择性切割发生变化。结果显示,重组MBSP(野生型与突变型)于毕赤酵母成功表达;酶学试验结果显示突变MBSP在不改变酶结构的前提下底物特异性发生了变化,并用生物信息学手段得到证实。而且,重组MBSP与胰蛋白酶一样,能水解蛋白产生小肽,因此热稳定性优于胰蛋白酶的重组MBSP有望应用于未来的质谱鉴定。
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