【摘 要】
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目的：利用敲除了肌切蛋白Adseverin (Ads)基因的RAW264.7细胞,研究Ads在破骨细胞形成过程中的表达及调控作用.方法：通过核因子κB受体激活子配体(receptor activator of nu
【机 构】
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中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院,广东省口腔医学重点实验室
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目的：利用敲除了肌切蛋白Adseverin (Ads)基因的RAW264.7细胞,研究Ads在破骨细胞形成过程中的表达及调控作用.方法：通过核因子κB受体激活子配体(receptor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞破骨细胞向分化,利用免疫印迹法检测Ads在破骨细胞形成过程中的表达情况；激光共聚焦显微镜观察Ads与丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)共定位情况；构建Ads基因敲除RAW264.7细胞系,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色、骨吸收陷窝实验观察敲除Ads后对RANKL诱导的破骨细胞形成和骨吸收功能的影响；激光共聚焦显微镜检测Ads敲除对破骨细胞形成过程中肌动蛋白环形成以及RANKL-RANK关键通路中核因子NF-κB的活化与核转位的影响.结果：RANKL诱导Raw264.7细胞形成破骨细胞过程中Adseverin表达显著升高,且Adseverin在成熟破骨细胞中高表达；Ads与F-actin的共聚关系发生改变,提示Ads表达与F-actin关系密切；TRAP染色和骨吸收陷窝实验结果显示,Ads基因敲除RAW264.7细胞形成TRAP+多核破骨细胞数量减少,骨吸收能力下降；免疫荧光结果显示Ads敲除后肌动蛋白环形成减少且NF-κB核转位受抑制.结论：破骨前体单核细胞中敲除Adseverin可抑制破骨细胞形成与骨吸收功能.
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