【摘 要】
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目的:利用染矽尘大鼠模型,观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）分泌的外泌体对染矽尘大鼠肺纤维化的干预作用。方法:使用全骨髓贴壁法分离、培养大鼠BMSCs,使用流式细胞术及三系分化对其鉴定。使用差速超速离心法分离、纯化第三代BMSCs细胞培养上清液中的外泌体,使用透射电子显微镜（TransmissionElectronMicroscope,TEM）、纳米颗粒跟踪分析（NanoparticleTrack
【出 处】
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2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集
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目的:利用染矽尘大鼠模型,观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）分泌的外泌体对染矽尘大鼠肺纤维化的干预作用。方法:使用全骨髓贴壁法分离、培养大鼠BMSCs,使用流式细胞术及三系分化对其鉴定。使用差速超速离心法分离、纯化第三代BMSCs细胞培养上清液中的外泌体,使用透射电子显微镜（TransmissionElectronMicroscope,TEM）、纳米颗粒跟踪分析（NanoparticleTracking Analysis,NTA）对其进行鉴定。将受体大鼠随机分为阴性对照组、二氧化硅模型组、BMSCs移植组和外泌体移植组,使用一次性非暴露式气管滴注法建立实验性矽肺肺纤维化大鼠模型（50mg/mL/只）。暴露二氧化硅后第二天,阴性对照组和二氧化硅模型组大鼠尾静脉回输1mL无菌DPBS,BMSCs移植组大鼠尾静脉回输1mLBMSCs悬液（2×106/只）,外泌体移植组尾静脉回输1mL外泌体悬液（200μg/只）。干预28天后统一处死大鼠,检测肺组织羟脯氨酸含量、肺组织病理学和促纤维化因子TGF-β1水平的改变情况,探索干预效果和可能涉及的机制。结果:（1）大鼠第三代BMSCs呈均一的长梭形,显示出大片漩涡样、放射状聚集生长状态;流式细胞术结果显示BMSCs高表达CD90、CD73和CD44（阳性率分别为99.58%、99.63%和99.85%）,低表达CD45和CD11b（阳性率为5.58%和0.04%）;此外茜素红S、油红O和甲苯胺蓝染色显示BMSCs成功分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞谱系。上述结果证实本实验培养的第三代细胞绝大多数都是BMSCs。（2） TEM结果显示使用差速超速离心法提取的外泌体的形状为圆形或椭圆形,大小不均一,有完整的膜结构,呈典型的杯状,内含低电子密度物质;NTA结果显示外泌体的粒径主峰为127.5nm,占所有颗粒的97.5%,颗粒浓度为7.5E+6/mL。上述结果证明使用差速超速离心法可以成功从BMSCs上清液中提取出外泌体。（3）与对照组相比,二氧化硅模型组大鼠肺组织中的羟脯氨酸含量增加。而移植外泌体和BMSCs后,羟脯氨酸含量有一定的减少（P＜0.05）。（4） H＆E和Masson三色染色结果显示,与对照组相比,二氧化硅模型组大鼠肺组织出现大量的炎性细胞浸润,伴有大量矽结节形成,蓝染胶原纤维增加,肺纤维化病变程度加重。然而移植外泌体和BMSCs后,炎性细胞和矽结节的数量和病变面积都有所减少,蓝染的胶原纤维减少,肺纤维化有所改善。此外,改良Ashcroft半定量评分结果与病理情况一致（P＜0.05）。（5）与对照组相比,二氧化硅模型组TGF-β1表达水平升高,而移植外泌体和BMSCs后,其表达水平有所降低（P＜0.05）。结论:（1）外泌体移植可以单独作为一种"无细胞"干预手段发挥和BMSCs类似的抑制二氧化硅诱导肺纤维化的疗效。（2）外泌体移植后可能通过降低促纤维化因子TGF-β1表达水平、减少HYP含量以改善二氧化硅诱导的肺纤维化。
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