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建立了反相高效液相色谱法测定雌三醇有关物质的方法.使用月旭Ultimate? LP-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,流动相为水和乙腈,采用梯度洗脱,检测波长280nm.有关物质测定中雌三醇和杂质A 能良好分离.雌三醇回收率为99.92%,线性范围为0.2μg~20μg.相比欧洲药典的正相条件,本方法的反相条件更加简便易行,成本更低,对环境更加友好.