猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:DINGDING122951
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从临床表现为断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,用猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代,培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株.分离毒株经细胞传25代后毒价显著提升,第35代毒价可达105.6TCID50/mL.采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明:病毒感染细胞后抗原主要分布在细胞核及细胞质中;病毒感染的阳性细胞呈点式分布,阳性细胞数可达50%以上;免疫电镜观察到病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团,单粒子直径约为17nm;病毒基因组由1768核苷酸构成,与Genbank登录的八个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上.用剂量为2mL的病毒细胞培养物,接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头,可引起典型的PMWS临床症状.研究结果为开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。
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