【摘 要】
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采用RT-PCR从旋毛虫中扩增出谷氨酸脱羧酶(TsGAD)基因全长,将其克隆到表达载体pET-30a(+)后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,应用比色法鉴定表达产物(rTsGAD
【机 构】
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东北农业大学,动物医学学院,黑龙江,哈尔滨 150030
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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采用RT-PCR从旋毛虫中扩增出谷氨酸脱羧酶(TsGAD)基因全长,将其克隆到表达载体pET-30a(+)后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,应用比色法鉴定表达产物(rTsGAD)的酶活性,并用纯化的GAD蛋白制备多克隆抗体.结果显示,成功构建了重组质粒pET-30a(+)-TsGAD,经SDS-PAGE分析,rTsGAD蛋白的分子质量约为57ku.利用比色法测得粗提的rTsGAD具有酶活性,酶活力为1.5U.制备的多克隆抗体效价较高,可达1：65 536.Western-blot分析结果显示,该多克隆抗体与TsGAD具有较强的反应性.结果表明,本试验成功原核表达了rTsGAD,并制备了多克隆抗体,为TsGAD定位以及进一步研究旋毛虫谷氨酸依赖型抗酸机制奠定了基础.
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