【摘 要】
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目的 体内和体外探讨酵母多糖(Zymosan,Zym)是否会引起T细胞和B细胞凋亡及其规律,同时采用研究不同浓度胍丁胺(Agmatine)进行干预以明确其对机体淋巴细胞凋亡是否具有保护作用.方法 在体内研究中,以C57BL/6小鼠为实验动物,腹腔注射Zym(600mg/kg和1500mg/kg)以制备小鼠致炎剂量和致死剂量体内腹膜炎模型,同时采用不同浓度(200mg/kg、400mg/kg和800
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆 400042
【出 处】
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2013中国医师协会中西医结合医师大会
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目的 体内和体外探讨酵母多糖(Zymosan,Zym)是否会引起T细胞和B细胞凋亡及其规律,同时采用研究不同浓度胍丁胺(Agmatine)进行干预以明确其对机体淋巴细胞凋亡是否具有保护作用.方法 在体内研究中,以C57BL/6小鼠为实验动物,腹腔注射Zym(600mg/kg和1500mg/kg)以制备小鼠致炎剂量和致死剂量体内腹膜炎模型,同时采用不同浓度(200mg/kg、400mg/kg和800mg/kg)的胍丁胺硫酸盐(Agmatine Sulfate Salt,ASS)为干预药物(致炎条件研究用200mg/kg ASS,致死条件研究ASS剂量用200mg/kg、400mg/kg和800mg/kg),设立对照组、Zym处理组和Zym复合各浓度ASS组,时间点为处理后12小时、24小时和7天(前2个时间点为致炎条件研究,后1个时间点为致死条件研究),到各时间点后取小鼠胸腺和脾,观察器官形态后制备细胞悬液,APC-CD4或APC-CD19、 FITC-Annexin V、 PI染色,流式细胞检测凋亡情况(凋亡和坏死细胞占CD4+/CD19+细胞的比例)；在体外研究中,取C57BL/6小鼠胸腺和脾细胞进行细胞培养,加入不同浓度Zym (0、 10、 50、 100、250和500μg/ml),同时分别加入不同浓度ASS(60、300、1500μM),以确定其最佳量效关系,设立组别同体内实验,时间点设立同体内实验中的致炎研究,后续方法同体内实验.结果 体内研究中,Zym处理7天后,小鼠脾和胸腺体积与对照组差异明显,凋亡率和坏死率在Zym和Zym复合800mg/kg ASS组中的差异不显著(P＞0.05),但与200mg/kg以及400mg/kg的差异较明显(P＜0.05).体外研究中,Zym与胸腺和脾细胞凋亡呈剂量依赖型关系,其最佳作用浓度为50μg/ml,而ASS发挥最佳保护效应的浓度为60μM.结论 Zym可以引起体内和体外T、B淋巴细胞大量凋亡(尤其是B细胞),而一定浓度ASS对机体炎症后的细胞凋亡具有保护作用,但与其浓度有关.60μM ASS对T细胞(包括胸腺和脾)的保护作用最强,随着ASS浓度的持续升高,保护作用开始减弱,但对B细胞的抗凋亡保护作用逐渐增强.
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