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目的：通过对脊髓I/R损伤过程中上调活跃的神经修复相关蛋白进一步研究验证其变化特点及作用机制,从而为寻找脊髓I/R损伤特异性诊断/治疗新靶点奠定坚实基础.
方法：本文以急性脊髓I/R损伤兔模型为研究对象,并以其损伤节段腰髓为研究标本,应用差异蛋白质组学双向电泳(DIGE)分析比较假手术对照组与再灌注0、12、24、48h时间点脊髓蛋白表达变化,成功获得各个时间点的差异蛋白,整合应用免疫组化(Immunohistochemistry；IHC)和免疫印迹(Western blotting；WB)分析方法对其中筛选出特异上调2倍以上的神经类蛋白质及其可能存在磷酸化修饰蛋白进行鉴定及功能分析。
结果：本论文应用腰3、4、5动脉阻断法(改良Kwun法)成功建立了急性兔脊髓轻度节段性I/R损伤动物模型.应用蛋白质组学双向电泳分析方法对假手术对照组与再灌注0、12、24、48h组损伤脊髓标本研究,结合质谱分析筛选获得差异表达2倍以上的蛋白21个,其中上调模式蛋白3个,分别为：α-tubulin、NF-M与NF-L蛋白.整合IHC和WB分析方法对3种上调模式蛋白进行了验证分析,在各损伤时间点脊髓组织中α-tubulin、MF-M和NF-L蛋白分别定位于神经元细胞膜、轴突及细胞浆中；其中在脊髓灰质、白质及前后角分布中,脊髓灰质较白质表达量增加(P<0.05)；脊髓前角和后角区域表达量未见明显差异(P>0.05).发现三种蛋白表达量随脊髓再灌注时限的延长具有依从性递增,而在脊髓再灌注24h达到峰值,后逐渐回归至脊髓再灌注初始水平,前期实验我们发现NF-M、NF-L可能发生了磷酸化修钸,其磷酸化蛋白与未磷酸化NF-M、NF-L蛋白表达量变化呈平行关系。
结论：α-tubulin、NF-M和NF-L蛋白对损伤脊髓神经元具有保护和修复作用,其作用机制可能是通过修复神经元细胞膜、促进轴突再生途径参与脊髓I/R损伤的保护,NF-M和NF-L蛋白对I/R损伤脊髓保护作用我们推测可能是通过其蛋白磷酸化修饰来实现.
方法：本文以急性脊髓I/R损伤兔模型为研究对象,并以其损伤节段腰髓为研究标本,应用差异蛋白质组学双向电泳(DIGE)分析比较假手术对照组与再灌注0、12、24、48h时间点脊髓蛋白表达变化,成功获得各个时间点的差异蛋白,整合应用免疫组化(Immunohistochemistry；IHC)和免疫印迹(Western blotting；WB)分析方法对其中筛选出特异上调2倍以上的神经类蛋白质及其可能存在磷酸化修饰蛋白进行鉴定及功能分析。
结果：本论文应用腰3、4、5动脉阻断法(改良Kwun法)成功建立了急性兔脊髓轻度节段性I/R损伤动物模型.应用蛋白质组学双向电泳分析方法对假手术对照组与再灌注0、12、24、48h组损伤脊髓标本研究,结合质谱分析筛选获得差异表达2倍以上的蛋白21个,其中上调模式蛋白3个,分别为：α-tubulin、NF-M与NF-L蛋白.整合IHC和WB分析方法对3种上调模式蛋白进行了验证分析,在各损伤时间点脊髓组织中α-tubulin、MF-M和NF-L蛋白分别定位于神经元细胞膜、轴突及细胞浆中；其中在脊髓灰质、白质及前后角分布中,脊髓灰质较白质表达量增加(P<0.05)；脊髓前角和后角区域表达量未见明显差异(P>0.05).发现三种蛋白表达量随脊髓再灌注时限的延长具有依从性递增,而在脊髓再灌注24h达到峰值,后逐渐回归至脊髓再灌注初始水平,前期实验我们发现NF-M、NF-L可能发生了磷酸化修钸,其磷酸化蛋白与未磷酸化NF-M、NF-L蛋白表达量变化呈平行关系。
结论：α-tubulin、NF-M和NF-L蛋白对损伤脊髓神经元具有保护和修复作用,其作用机制可能是通过修复神经元细胞膜、促进轴突再生途径参与脊髓I/R损伤的保护,NF-M和NF-L蛋白对I/R损伤脊髓保护作用我们推测可能是通过其蛋白磷酸化修饰来实现.