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根据GenBank TGEV S基因设计一对引物，并在5引物和3引物中引入EcoRI、NotI酶切位点，经PCR扩增后克隆于pBS-T载体，转化TOP10感受态，提取质粒酶切鉴定后，与pPIC9K载体连接，转化TOP10感受态，鉴定阳性克隆，线性化重组穿梭质粒，电转GS115感受态，G418筛选克隆子。利用酵母Pichia pastoris真核表达系统，表达TGEVS蛋白。