【摘 要】
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以火菇素蛋白的多克隆抗体为探针对构建的金针菇cDNA表达型文库进行免疫学筛选.将获得的阳性噬菌体克隆与辅助噬菌体ExAssist interference-resistant helper phage共同孵育,
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以火菇素蛋白的多克隆抗体为探针对构建的金针菇cDNA表达型文库进行免疫学筛选.将获得的阳性噬菌体克隆与辅助噬菌体ExAssist interference-resistant helper phage共同孵育,在辅助噬菌体的作用下,进行切割成能够自主环化、复制和表达的噬菌粒,转染大肠杆菌XLOLR strain,构建成表达菌株.利用PCR、体外诱导表达、免疫印迹、序列测定和分析对阳性克隆进行鉴定.结果表明阳性克隆插入片断大小为850kb〔含UTR(5leader & 3trailer)、ORF〕,ORF编码208个氨基酸.通过BLAST对相关基因序列数据库进行同源序列分析、比对发现序列相似性很低,说明它是一个新的序列.将获得的序列(含UTR和ORF)送入GenBank,并被接收,ID number;Bankit 529886;Accession number:AY279552.经IPTG诱导,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40﹪以上.Western blotting鉴定表明,表达产物能被火菇素抗体所识别,证实了该表达产物含有火菇素的抗原表位.
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