小麦EMS休眠突变体WRKY转录表达验证及相关生理指标检测

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小麦种子的休眠性是影响其穗发芽抗性的重要因素,创建休眠突变体也是解决小麦生产中穗发芽的一个重要途径。本研究根据前期创建和筛选到的休眠突变体并且对其进行转录组测序的基础之上,进一步通过生物信息学分析,发现了编码几丁质酶相关通路中的基因其转录水平在野生型与突变体之间具有很大差异,预测其可能与小麦种子休眠特性密切相关,通过分析发现了WRKY类转录因子的表达变化与该突变体密切相关。通过q PCR方法对前期转录组测序结果中的WRKY类转录因子进行验证,验证结果表明:与对照品系龙13-3778相比,突变体LQ1813和LQ1815中WRKY转录因子WRKY6、WRKY46、WRKY24、WRKY55和WRKY71呈现显著上调表达;转录因子WRKY23、WRKY61、WRKY57、WRKY65和WRKY50呈现显著下调表达。对突变体LQ1813和LQ1815材料进行了表型鉴定、发芽指数、抗逆性及与发芽相关酶活性的鉴定,结果表明:对照组材料的GI值、内源脱落酸以及几丁质酶活性、α-淀粉酶活性以及还原糖含量均高于两份突变体小麦材料。另外本研究对WRKY46进行克隆,获得了WRKY46-A、WRKY46-B和WRKY46-D。并且三种材料于B染色体上,共扩增出5种序列,进一步序列比对发现突变体材料LQ1815在第307个位点上存在一个突变位点。并且其氨基酸序列在第三外显子上发生突变,由甘氨酸G(Gly)突变位天冬氨酸D(Asp)。
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