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第一部分GLP-1受体激动剂对可卡因诱导小鼠条件位置偏爱行为的影响目的药物成瘾危害巨大,缺乏有效治疗药物。最近临床前研究表明GLP-1受体激动剂可以改善可卡因诱导的奖赏行为。本课题第一部分拟通过腹腔注射可卡因建立可卡因诱导小鼠条件位置偏爱(Conditioned Place Preference,CPP)和CPP恢复范式,行为学观察艾塞那肽来对可卡因诱导CPP获取、表达、消退和恢复的影响。方法(1)C57BL/6J小鼠完成2日CPP黑白穿梭箱适应后进行自然偏爱(Baseline preference)测试。(2)构建小鼠可卡因CPP和CPP恢复范式,观察艾塞那肽对可卡因诱导的CPP获取、表达、消退和恢复的影响。结果(1)2日CPP适应期结后的自然偏爱测试得分结果示:绝大多数小鼠对黑色箱子产生明显偏爱(P<0.001)。(2)可卡因CPP匹配结束后CPP得分结果示:与自然偏爱比,Coc+Sal组的小鼠CPP得分显著提高(P<0.001),提示可卡因诱导了小鼠CPP。且与Coc+Sal组相比,艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组的CPP得分均明显下降(P<0.01),提示艾塞那肽预处理抑制了可卡因诱导小鼠CPP获取。(3)与上述结果类似,与自然偏爱相比,Coc+Sal组的CPP得分显著提高(P<0.01),且与Coc+Sal组相比,艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组的CPP得分明显下降(P<0.01),提示可卡因诱导了小鼠CPP,且单次腹腔注射艾塞那肽抑制了可卡因诱导的CPP表达。(4)早期CPP消退得分结果示:与自然偏爱相比,Coc+Sal组得分显著升高(P<0.01),且与Coc+Sal组相比、艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组得分明显降低(P<0.05),表明可卡因介导的小鼠CPP尚未达到消退标准,且艾塞那肽促进了早期CPP消退。而晚期CPP消退测试示:与Coc+Sal组相比,艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组的CPP得分无明显差异(P>0.05);而与自然偏爱相比,艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组得分也无明显差异(P>0.05),表明Coc+Sal组和艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组小鼠已达到CPP消退标准。此外我们还观察了CPP消退期间腹腔注射艾塞那肽对CPP恢复影响。结果发现:与自然偏爱相比,Coc+Sal组小鼠的CPP得分再次显著提高(P<0.001);而与Coc+Sal组相比,艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组的CPP得分均明显下降(P(10.0μg/kg)<0.01,P(1.0μg/kg)<0.01和P(0.1μg/kg)<0.05),CPP消退期间腹腔注射艾塞那肽可抑制可卡因诱导的CPP恢复。(5)与上述CPP恢复实验步骤不同,直到CPP恢复测试当日小鼠才被注射艾塞那肽。CPP得分结果示:与自然偏爱相比,经可卡因(10mg/kg)处理后,Coc+Sal组的CPP得分再次显著提高(P<0.01)。而与Coc+Sal组相比,单次腹腔注射艾塞那肽(10.0μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg)组得分无明显下降(P>0.05),提示CPP恢复日单次腹腔注射艾塞那肽不能抑制可卡因诱导的CPP恢复。结论(1)腹腔注射20mg/kg和10mg/kg的可卡因分别成功构建了小鼠CPP范式和CPP恢复范式。(2)腹腔注射艾塞那肽对可卡因诱导的小鼠CPP获取和表达中产生了重要抑制作用。(3)艾塞那肽不仅促进了可卡因诱导的小鼠CPP消退且抑制了CPP恢复。因此,上述实验结果证实腹腔注射艾塞那肽对可卡因诱导的小鼠适应不良行为发挥了重要调节作用。第二部分GLP-1受体激动剂改善可卡因诱导小鼠条件位置偏爱行为的机制目的同第一部分实验建立可卡因诱导的小鼠CPP和CPP恢复范式,采用免疫蛋白检测技术来探讨艾塞那肽改善可卡因诱导的小鼠适应不良行为的机制。方法(1)同第一部分实验方法构建小鼠可卡因CPP范式和CPP恢复范式。观察艾塞那肽对可卡因诱导小鼠(CPP)获取、消退和恢复的潜在影响。(2)免疫组织化学和免疫荧光标记观察小鼠海马中TLR4、My D88和NF-κβp65表达情况。(3)蛋白印迹技术检测TLR4、NF-κβp65、My D88、TNF-α和IL-1β蛋白表达水平。结果(1)CPP得分结果:与Sal+Sal组比,Coc+Sal组CPP得分显著提高(P<0.001)而Sal+Ex4组得分无显著差异(P>0.05),提示可卡因而不是生理盐水和艾塞那肽(Ex4)成功诱导了CPP范式发生。与Coc+Sal组比,Coc+Ex4组的CPP得分明显下降(P<0.01),提示艾塞那肽(Ex4)抑制了CPP获取。在早期CPP消退测试中,与Sal+Sal组比,Ex4还促进了早期CPP消退(P<0.05)。在早期CPP恢复测试中,与Sal+Sal组比,Coc+Sal组CPP得分显著提高(P<0.001)而Sal+Ex4组CPP得分无显著差异(P>0.05),提示可卡因成功诱导了CPP恢复范式;与Coc+Sal组相比,Coc+Ex4组的CPP得分明显下降(P<0.01),提示艾塞那肽抑制了CPP恢复。(2)免疫组化发现在Sal+Sal、Coc+Sal、Sal+Ex4和Coc+Ex4组中小鼠海马内TLR4、NF-κβp65和My D88表达水平存在明显的不同。(3)同上,免疫荧光标记技术也证实在Sal+Sal、Coc+Sal、Sal+Ex4和Coc+Ex4组中小鼠海马组织中TLR4、NF-κβp65和My D88表达水平存在显著差异(P<0.01);与Sal+Sal组比较,Coc+Sal组小鼠海马上述3种细胞因子荧光密度值明显升高(P<0.001);而与Coc+Sal组比较,Coc+Ex4组上述3种细胞因子荧光密度值则显著下降(P<0.01),提示艾塞那肽能降低可卡因暴露后TLR4、NF-κβp65和My D88的高表达。(4)与上述实验结果一致,免疫蛋白印迹也检测到小鼠海马TLR4、NF-κβp65、My D88、TNF-α和IL-1β蛋白表达水平存在显著性差异(P<0.01)。与Sal+Sal组比较,Coc+Sal组小鼠海马内上述5种细胞因子蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与Coc+Sal组比较,Coc+Ex4组小鼠海马内上述5种细胞因子蛋白表达不同程度下降(P<0.05)。结论(1)可卡因暴露不仅成功构建了小鼠CPP和CPP恢复范式而且激活了TLR4介导的炎症通路。(2)艾塞那肽除了对可卡因诱导的小鼠CPP获取、消退和恢复发挥了重要调节作用外也抑制了TLR4介导的炎症通路。因此,以上实验结果证实TLR4介导的炎症通路与可卡因诱导的小鼠适应不良行为相关。艾塞那肽可改善这种适应不良行为,且这一行为学效应可能与其下调TLR4介导的炎症通路相关。