【摘 要】
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蜱是一类以吸血为生的寄生虫,对人和动物有着直接和间接的危害。因此,控蜱防病越来越来受到人们重视。目前,采用化学药物灭蜱仍然是控蜱的主要措施。但该措施具有造成环境污染、产生耐药虫株等诸多缺点。而探索新的控蜱策略显得尤为重要。自噬是一个正常的细胞所必需的、受自噬相关基因调控的生理过程。如今,许多学者已对长角血蜱、微小扇头蜱、肩突硬蜱和镰形扇头蜱的一些自噬相关基因及其表达水平进行了分析研究。本研究以褐黄
【基金项目】
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湖南省自科基金项目（2018JJ2167）；
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蜱是一类以吸血为生的寄生虫,对人和动物有着直接和间接的危害。因此,控蜱防病越来越来受到人们重视。目前,采用化学药物灭蜱仍然是控蜱的主要措施。但该措施具有造成环境污染、产生耐药虫株等诸多缺点。而探索新的控蜱策略显得尤为重要。自噬是一个正常的细胞所必需的、受自噬相关基因调控的生理过程。如今,许多学者已对长角血蜱、微小扇头蜱、肩突硬蜱和镰形扇头蜱的一些自噬相关基因及其表达水平进行了分析研究。本研究以褐黄血蜱为研究对象,通过RACE法克隆出HfATG4和HfATG5的全长序列,并采用RT-PCR法测定HfATG4和HfATG5在不同生长阶段、不同饱血状态和不同组织器官的表达水平,为开发广谱抗蜱疫苗提供依据。主要的研究内容、方法、结果如下:1.以蛋白质组学分析结果为线索,从褐黄血蜱卵巢转录组文库（PRJNA600997）搜到9个Atg蛋白序列（Atg3、Atg4、Atg5、Atg6、Atg7、Atg8、Atg13、Atg16、Atg101）。分析发现:不同Atg蛋白的序列差异极大;但来自不同蜱的同种Atg的序列高度相似。2.以RACE法扩增Cluster-24081.57394和Cluster-24081.6376的5’和3’端,获得HfATG4和HfATG5全长c DNA。分析显示:HfATG4全长为1361bp,其中ORF框为1164bp,编码387aa;HfATG5全长为1813 bp,ORF框大小813 bp,编码序列长270aa。3.以RT-PCR法测定ATG4和HfATG5在幼、若、成三阶段的表达水平均为:幼蜱＞雌蜱＞雄蜱＞若蜱。在四种不同饱血状态下表达量为:HfATG4在1/4饱血雌蜱表达量最高,HfATG5在4/4饱血雌蜱表达量最高。HfATG4在唾液腺、卵巢、中肠和体壳的表达情况是:饱血的高于半饱血的;HfATG5在唾液腺、卵巢、中肠的表达情况是:饱血的高于半饱血的,在体壳的表达情况是,半饱血的高于饱血的。在胚胎发育前期HfATG4上调,HfATG5下调,后期基本稳定。研究结果表明:褐黄血蜱的自噬蛋白种类丰富,可为筛选蜱传病防治的候选分子提供物质基础。HfATG4和HfATG5基因在不同生长阶段以及不同饱血状态下不同的组织器官的差异表达。提示其可能参与蜱虫生长发育和吸血消化的过程,具有作为抗蜱疫苗候选分子潜质。
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