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黄鳝（Monopterus albus）是我国重要的高经济价值淡水养殖鱼类,2017年统计产量是38.6万吨,基础产值为270亿元,主要分布在湖北、江西、安徽以及湖南等省份。黄鳝养殖过程中易爆发大规模疾病,给黄鳝养殖业带来巨大经济损失。免疫器官是免疫作用发挥的前提和重要场所,不同鱼类其免疫器官的发育时间节点及方式也有所不同。目前,国内、外对硬骨鱼类免疫器官形态发育的研究已有许多报道,但关于黄鳝免疫器官发育的研究相对较少。本文对黄鳝胸腺、肝脏和头肾等主要免疫器官的早期发育进行了研究,研究结果可以丰富黄鳝免疫系统发育的理论知识,同时对黄鳝重要疾病的免疫防控和产业的可持续发展具有重要意义。本文以早期发育的黄鳝为研究对象,首先对黄鳝不同发育时期最佳内参基因的筛选进行了研究,以期为黄鳝免疫相关基因的精准定量提供依据。然后对不同发育时期的黄鳝的胸腺、肝脏和头肾的rag1基因、rag2基因的表达趋势进行了分析,在此基础上,运用原位杂交技术分析黄鳝各器官中rag1、rag2基因的时间和空间表达,确定不同发育时期淋巴细胞在各器官中的时空定位情况。此外还运用HE染色组织切片法,分析黄鳝上述各器官的形态结构特征变化。主要研究结论如下:1.黄鳝不同发育时期最佳内参基因的筛选综合使用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件评估了18Sr RNA、β-actin、EF1α和GAPDH这四个内参基因在不同情况下的稳定性。实验结果表明,内参基因在胚胎期的稳定性排序为18Sr RNA＞β-actin＞GAPDH＞EF1α,其中18Sr RNA是最稳定的内参基因。对于不同发育阶段的免疫相关器官,胸腺中内参基因的稳定性排序是β-actin＞GAPDH＞EF1α＞18Sr RNA,其中β-actin是最稳定的内参基因。在脾脏和头肾中,稳定性排序为EF1α＞GAPDH＞β-actin＞18Sr RNA,其中EF1α是最稳定的内参基因。此外,在感染Cr ERV的黄鳝肾细胞（Cr E-K）中,稳定性排序为EF1α＞β-actin＞GAPDH＞18Sr RNA,EF1α是最稳定的内参基因。同时,在病毒感染Cr E-K细胞后,基于上述四个内参基因分别检测CTNNB1和NOTCH1的表达量变化,证实了感染Cr ERV后黄鳝肾细胞的内参基因稳定性的结果正确。2.黄鳝主要免疫器官发育时间节点的确定基因转录水平分析发现黄鳝在胚胎器官形成期开始出现rag1基因和rag2基因表达。从器官形成期到出膜后45天,在胸腺中以及在肝脏和头肾中都能检测到rag1和rag2表达,并且在出膜后45天,胸腺、肝脏和头肾中都检测到最高的rags基因转录水平。3.黄鳝不同发育时期淋巴细胞的时空定位分析采用原位杂交技术分析黄鳝主要免疫器官中rag1、rag2基因的时间和空间表达,从而确定不同发育时期淋巴细胞在各器官中的时空定位。结果表明,黄鳝rag1和rag2基因最早在受精后5天,即器官形成期开始出现信号表达;出膜后2天,咽喉上皮处有信号表达;出膜后10天,信号在胸腺的边缘出现表达;出膜后24天,信号在胸腺的表面和内部随机出现;出膜后45天,信号在胸腺外区集中表达,信号丰富,而胸腺内区表达量较少。同时,黄鳝出膜后2天至出膜后45天都在整个肝脏和头肾的造血组织随机分布着rag1和rag2信号。4.黄鳝主要免疫器官早期发育的形态结构特征（1）黄鳝胸腺早期发育的形态结构特征变化:黄鳝的胸腺原基在出膜期就已形成,分布于咽喉上皮上。出膜后6天,胸腺结构变得疏松,淋巴细胞在网状结构中聚集,并开始分化。随后,胸腺的体积不断增大,淋巴细胞增多。黄鳝出膜后10天,结缔组织和毛细血管开始向胸腺实质延伸,胸腺的组织结构越加致密,出现哈氏小体。直到出膜后45天,黄鳝的胸腺开始分区,内区的胸腺细胞数量较少而稀疏分布,染色较浅;而外区密集分布着许多的小淋巴细胞,细胞染色较深,呈现蓝紫色。（2）黄鳝肝脏早期发育的形态结构特征变化:黄鳝出膜后2天,肝脏细胞团出现,肝细胞内贮有脂肪,存在空泡结构,肝细胞索之间存在较大的空隙,而肝脏外侧边缘存在着少量血细胞。出膜后6天,肝脏内部的肝血窦增加,血细胞聚集,肝细胞索排列得更加紧密。出膜后17天,肝脏的体积增大,出现明显可见的中央静脉。随着鱼体的继续发育,肝脏体积越来越大,窦状隙数量减少,肝细胞索越加致密。出膜后24天,黄鳝肝脏分叶不明显,肝脏内的结缔组织结构减少,肝实质变得致密,血管系统发达,肝实质内随机分布着静脉和胆管,肝组织结构变得和成鱼相似。（3）黄鳝头肾早期发育的形态结构特征变化:黄鳝出膜后2天,头肾组织出现,有若干卷曲肾小管结构存在,大致分为左右两叶,其基部相连,肾管的周围出现少量的血细胞和淋巴细胞。出膜后6天,肾管周围的血细胞和淋巴细胞增多。出膜后10天,头肾肾管周围血细胞成团,肾管扩张。出膜后17天,头肾体积增大,淋巴细胞聚集,肾管周围仍有血细胞分布。出膜后24天,肾管慢慢往头肾中部聚集,肾管周围的淋巴细胞数量增多,粒细胞也变得丰富。至出膜后45天,黄鳝肾管开始退化,部分肾管的上皮细胞结构变得模糊不清,造血组织增加。