中国大鲵（Chinese Giant Salamander,Andrias davidianus）,俗称娃娃鱼,是我国的二级保护动物。随着大鲵人工养殖的快速发展,疾病对大鲵的危害也愈发严重,其中,大鲵虹彩病毒（Chinese giant salamander iridovirus,GSIV）感染引起的大鲵虹彩病毒病危害最为严重,给养殖业造成了巨大的经济损失。先天免疫系统在抵御病原入侵,保护机体免受病原感染方面起到重要的作用。其中,干扰素（Interferon,IFN）诱导的寡聚腺苷酸合成酶蛋白家族（2’-5’-Oligoadenylate synthetase family,OASs）是宿主抗病毒感染关键的先天免疫应答蛋白之一。OASs广泛分布于鱼类、爬行动物、鸟类和哺乳动物等有颌脊椎动物中,与免疫调节功能相关,但两栖类中还未有关于OASs抗病毒功能研究的相关报道。因此,OASs作为先天免疫系统的重要组成部分,在中国大鲵的抗病毒感染研究中有着重要意义。本研究首次克隆了中国大鲵OAS基因（AdOAS）,鉴定了AdOAS基因的开放阅读框（Open Reading Framec,ORF）c DNA序列,并对其在大鲵体内和体外的表达模式及抗病毒功能进行了研究。主要内容包括以下几个方面:1.中国大鲵OAS（AdOAS）基因ORF区c DNA克隆及序列分析以中国大鲵脾和肾的cDNA作为模板,PCR扩增得到AdOAS的ORF区cDNA序列长度为1185 bp,编码394个氨基酸,包括一个核苷酸转移酶结构域（40-143 aa）和一个保守的OAS1 C超家族结构域（165-341 aa）。AdOAS所编码的蛋白分子量为45 k Da,其理论等电点为7.968。Gen Bank选取的序列比对结果表明,AdOAS与常见脊椎动物的同源性为76%～99%。系统进化树显示AdOAS与墨西哥钝口螈OAS1聚为一支,且具有较高的同源性。2.AdOAS在大鲵体内和体外的表达模式实时荧光定量PCR（Quantitative Real-Time PCR,qRT-PCR）结果表明,AdOAS m RNA在所有被检测的组织中均有分布。与表达量最低的脾脏组织相比,肠道中AdOAS的m RNA相对表达量最高,约是脾脏中的9倍;心脏中AdOAS有较高的表达水平,其相对表达量约是脾脏中的8倍。GSIV感染大鲵后,感染6 h和12 h后肾脏中AdOAS m RNA水平显著上调;48 h后m RNA水平达到峰值,与未感染对照组有极显著差异;感染72 h时,和初始0 h AdOAS m RNA水平相比,基本保持稳定。在肝脏中,感染24 h和48 h后,AdOAS的m RNA水平显著上调,感染72 h后达到峰值,与未感染对照组相比,差异极显著。脾脏中,感染6 h后,AdOAS的m RNA水平略有上升;72 h达到峰值,表现出极显著的差异,而在12 h、24 h和48 h无显著变化。在体外,GSIV感染GSM细胞24 h时AdOAS的m RNA水平显著上调,感染48 h后达到最高水平。3.AdOAS基因真核质粒的构建及功能研究构建真核表达质粒pm Cherry N1-AdOAS,并转染至GSM细胞中,经Western blot证实,重组pm Cherry N1-AdOAS蛋白分子量为73 k Da,而转染pm Cherry N1质粒的蛋白分子量为28 k Da。GSM细胞转染重组质粒48 h后,在共聚焦培养皿中将细胞清洗、固定,DAPI染色细胞核,激光共聚焦显微镜观察亚细胞定位发现,AdOAS蛋白在细胞质中广泛表达,少量表达于细胞核中。分别将pm Cherry N1-AdOAS和pm Cherry N1转染至GSM细胞中48 h后,时序感染GSIV,与空载对照组和未处理组细胞相比,GSIV主要衣壳蛋白（Major Capsid Protein,MCP）m RNA水平在感染GSIV 12 h、24 h和48 h时显著降低。Western blot分析表明,和空载对照组和未处理组细胞相比,在GSIV感染后24 h、48 h和72 h后,过表达AdOAS组GSIV MCP蛋白合成明显降低。采用数字微滴PCR（Digital Droplets PCR,dd PCR）方法分析在病毒感染过程中AdOAS对MCP基因拷贝数的影响。结果表明,与正常组细胞和转染pm Cherry N1空载质粒组的细胞相比,过表达AdOAS组,GSIV MCP基因拷贝数在48 h和72 h显著减少。以上结果表明,在大鲵体内和体外过表达AdOAS后,都能够明显抑制GSIV的复制,具有显著的抗病毒感染功能。