流感病毒是重要的呼吸道疾病的病原,目前主要采用疫苗接种的方式来预防其感染,但流感病毒极易发生变异,疫苗的有效性因此面临巨大挑战;而流行性乙型脑炎虽然可以用疫苗进行预防,但目前尚未有药物能够对乙脑病毒起到很好的抑制作用而用于乙脑治疗。因此,研制能够起到广谱作用的抗病毒药物对此类病毒病的防治就显得至关重要。KPT-335是一种核输出蛋白抑制剂,作为一种新型抗病毒药物,能够抑制流感病毒在体内外的增殖。本研究通过化学方法对KPT-335进行合成或修饰改造生成新的衍生物,进而研究其抗病毒效果,以期得到有效的抗病毒药物。1.KPT-335及其衍生物的合成:以三氟甲基苯腈和丙炔酸为起始原料,通过加成、取代、水解和缩合等化学反应成功合成终产物KPT-335;并在此基础上,合成相应的衍生物。用1HNMR和MS对终产物和相应衍生物分子的结构进行分析和鉴定。结果显示,化合物分子结构和分子量正确,成功合成5种新的衍生物。2.KPT-335及其衍生物对流感病毒增殖的影响。以流感病毒感染MDCK细胞为模型,通过Reed-Muench方法进行计算流感病毒的TCID50,确定以100个TCID50为病毒接种量进行感染细胞。通过CCK-8检测细胞存活率的方法,得出在药物浓度为4μmol/L时细胞存活率大于80%,20 μmol/L时,细胞的存活率在60%左右,选取药物浓度为4 μmol/L、8μmol/L和16 μmol/L三个药物浓度进行验证药物对流感病毒的抑制作用;在加入病毒液孵育1小时后吸去病毒液加入药物KPT-335及其衍生物继续孵育48小时,显微镜下可见加入KPT-335的药物组细胞存活数明显高于病毒感染组,而加入衍生物的药物组细胞存活数明显降低。结果表明,KPT-335能够抑制流感病毒的繁殖,衍生物抑制流感病毒增殖的效果不显著。3.KPT-335及其衍生物对乙脑病毒增殖的影响。以乙脑病毒感染BHK-21细胞为模型,通过Reed-Muench方法进行检测乙脑病毒的感染力,用乙脑病毒感染BHK-21细胞,通过在显微镜下观察细胞发生病变孔的数量,计算乙脑病毒的TCID50,确定以100个TCID50为病毒接种量进行后续试验;通过CCK-8检测细胞存活率的方法,测定了 KPT-335及其衍生物对BHK-21细胞的毒力,结果表明药物浓度为50 μmol/L时,细胞存活率在60%左右,所以选取5μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L三个药物浓度探究KPT-335及其衍生物对乙脑病毒增殖的影响。通过先接种病毒后加药孵育48小时观察细胞生长状态的方法,表明了 KPT-335对于乙脑病毒的增殖有一定的抑制效果,但其衍生物并没有起到明显的作用。试验结果证明,KPT-335能够抑制流感病毒的增殖,对乙脑病毒的繁殖也有一定的抑制作用,但其衍生物对于流感病毒和乙脑病毒并没有明显的抑制效果。所以,KPT-335在防治此类病毒病中具有广泛的应用前景。