猪瘟和蓝耳病快速检测方法的建立和应用

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猪瘟是由黄病毒科瘟病毒属猪瘟病毒引起的猪的一种高度传染性病毒病。猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种严重危害养猪业的接触性传染病。近些年来,这两种病的爆发给我国的养猪业带来的巨大的损失。快速、准确、简便的检测方法对于控制和预防这两种病都有重要的意义,本研究从分子生物学和免疫学出发,建立了几种快速检测这两种病毒的方法,这对养猪业的健康发展有着重要的意义。本研究根据猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因保守序列设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重RT-PCR一步法同时检测这两种病毒。根据Genbank发表的猪瘟病毒5’NTR核苷酸序列设计了一对特异性引物,并建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒方法。根据Genbank发表的繁殖与呼吸综合征病毒M基因核苷酸序列设计了一对特异性引物,并建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法。本研究根据这两种病毒的免疫学特性,在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征的双重斑点免疫金渗滤法。这些方法的建立,不仅对这两种疾病的临床检测提供了理论依据和方法指导,而且对这两种疾病的预防和临床检测方法的进一步研究都具有十分重要的意义。
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