【摘 要】
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该文利用杉木作图群体母本元性系"句容0号"的三、四月份刚抽出来的嫩茎作为材料,构建了杉木的cDNA文库.为了提高构建cDNA文库的质量,在实验过程中,综合比较了杉木总RNA的提取
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该文利用杉木作图群体母本元性系"句容0号"的三、四月份刚抽出来的嫩茎作为材料,构建了杉木的cDNA文库.为了提高构建cDNA文库的质量,在实验过程中,综合比较了杉木总RNA的提取方法,最终选择Concert PlantRNAReagent作为杉木RNA的提取方法,提高了建库所需RNA的完整性和纯度;利用Poly(A<+>) mRNAisolationkit对mRNA进行了纯化,有效地去除了绝大部分的tRNA和rRNA;利用Stratagene公司的λZAPExpresscDNASynthesisKitandλZAPExpresscDNAGigapackIIIGoldCloningKit作为cDNA建库试剂盒,方便了实验的操作,保证了构建的杉木cDNA文库的质量.实验结果表明:构建的杉木cDNA文库初级文库的库容量为3×10<5>,扩增文库的滴度为0.15x 10<9>pfu/ml,通过PCR扩增和双酶切结果表明,插入片段的大小平均在500bp以上,可以达到cDNA建库的标准.该研究的结果为杉木结构和功能基因组的研究提供了必要的材料,奠定了重要基础.
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