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沙门氏菌属于肠杆菌科,是可引起人畜共患病的革兰氏阴性杆菌。沙门氏菌外膜蛋白可诱导巨噬细胞凋亡,协助细菌具有耐药性,并作为毒力因子在细菌的致病过程中发挥重要作用。本论文通过对甲型副伤寒沙门氏菌四种外膜蛋白基因btuB、mipA、nmpC和pagC的分布进行了初步研究并对编码的外膜蛋白BtuB、MipA、NmpC和PagC的免疫原性进行了评价,此外对mipA基因在鼠伤寒沙门氏菌中的功能进行了探究。一、btuB、mipA、nmpC和pagC四种基因在肠道细菌中的研究。本实验室在前期研究中通过免疫蛋白质组学筛选到四个具有强免疫原性的外膜蛋白BtuB、MipA、NmpC和PagC,编码四种蛋白的基因分别为btuB、mipA、nmpC和pagC。应用PCR基因扩增技术,检测上述四种基因在141株肠道细菌中的分布情况。结果显示在大肠埃希氏菌和志贺氏菌未携带nmpC和pagC基因,部分沙门氏菌株携带这两种基因,值得注意的是与甲型副伤寒沙门氏菌不同,伤寒沙门氏菌不具有nmpC基因。上述结果为伤寒类疾病的临床诊断及新疫苗研发提供了参考。二、BtuB、NmpC和PagC外膜蛋白免疫原性的研究。利用阴离子交换法及固化金属离子亲和层析方法对甲型副伤寒沙门氏菌的外膜蛋白NmpC、PagC、his-NmpC和his-PagC进行纯化,获得纯度大于90%的目的蛋白。首先, NmpC和PagC蛋白分别与铝佐剂及壳聚糖结合后,免疫小鼠后检测抗体,结果显示铝佐剂结合组的抗体滴度与壳聚糖结合组并无显著差异;其次,通过与铝佐剂结合,his-BtuB、his-NmpC,和his-PagC联合免疫小鼠后,发现IgG抗体滴度差异显著;最后, NmpC、PagC、his-NmpC和his-PagC分别与铝佐剂结合后免疫小鼠,实验结果显示,组氨酸标签具有一定的免疫原性,带标签免疫组的抗体滴度与无标签免疫组差异显著。三、鼠伤寒沙门氏菌mipA基因功能的研究。利用分子生物学技术构建mipA同源突变盒,结合λ-Red噬菌体重组系统,将卡那基因替代鼠伤寒沙门氏菌基因组mipA基因,成功构建了50013△mipA::kan缺失株,50013mipAH互补株,50333△mipA::kan缺失株,50333mipAH互补株。通过血清学实验及生理生化鉴定,结果显示mipA缺失并不影响细菌的表型和生理生化特性;通过毒力评价实验结果显示,mipA基因缺失后50013△mipA::kan缺失株侵袭能力远远大于50013野生株和50013mipAH互补株,mipA过表达株50013mipAH侵袭能力较50013野生株减弱,本实验证明了mipA在鼠伤寒沙门氏菌的侵袭方面发挥着重要作用。