论文部分内容阅读
目的:探究丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对大鼠脑组织氧化损伤和i NOS/p38MAPK信号通路的影响,为进一步研究ACN的神经系统毒性提供依据。方法:选取50只SPF级健康成年雄性SD大鼠,全程饲养于甘肃中医药大学SPF级实验室,按体重随机分为5组,分别为对照组、低、中、高剂量组和NAC组,每组10只。适应性饲养一周后,低、中、高剂量组分别以12.5、25.0、50.0mg/kg ACN灌胃,对照组给予玉米油灌胃,NAC组先给予300.0mg/kg NAC灌胃,30分钟后再灌胃50.0mg/kg ACN,1次/天,6天/周,共灌胃13周。末次灌胃结束后,次日称重并颈椎脱臼处死大鼠。(1)剥离大鼠脑组织,计算脑组织脏器系数。(2)分光光度计和酶标仪检测大鼠脑组织氧化应激生化指标:超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)。(3)分光光度计和酶标仪检测大鼠脑组织一氧化氮(NO)、总一氧化氮合酶(tNOS)。(4)Western blot检测大鼠脑组织三种NOS合酶亚型(诱导型/免疫型一氧化氮(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白的表达水平。(5)Real Time PCR检测大鼠脑组织p38 mRNA表达水平,并用Western blot检测大鼠脑组织p38 MAPK信号通路的激活及p-p38和p38蛋白表达水平。结果:(1)相比于对照组,ACN各剂量组大鼠脑组织脏器系数均显著降低(P<0.05)。相比于NAC组,高剂量组大鼠脑脏器系数降低(P>0.05)。(2)随着ACN染毒剂量增加,大鼠脑组织SOD和CAT水平逐渐降低,MDA含量呈剂量依赖性升高。单因素方差分析结果显示,与对照组相比较,高剂量组GSH-Px、SOD水平显著降低(P<0.05),MDA含量增加(P<0.05);中剂量组GSH含量降低(P<0.05);低剂量组CAT含量降低(P<0.05)。与NAC组相比,高剂量组GSH含量和SOD、GSH-Px和CAT水平降低(P>0.05),MDA含量增加(P>0.05)。(3)随着ACN染毒剂量增加,大鼠脑组织NO含量和tNOS活力均呈上升趋势,且高剂量组NO含量和t NOS显著高于对照组。NAC组NO含量与高剂量组比较升高(P>0.05),tNOS水平降低(P>0.05)。(4)Western blot结果显示,相比于对照组,ACN高剂量组大鼠脑组织iNOS和nNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.05),eNOS蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与NAC组相比较,高剂量组iNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。(5)Real Time PCR结果显示,与对照组相比较,高剂量染毒组p38 mRNA表达水平升高(P<0.05),且高于NAC组(P<0.05)。Western blot结果显示,相比于对照组,ACN高剂量组大鼠脑组织p-p38蛋白表达水平和p-p38/p38比值显著升高(P<0.05),且显著高于NAC组(P<0.05)。结论:ACN慢性染毒可诱导大鼠脑组织发生氧化损伤,从而激活iNOS/p38MAPK信号通路,这可能是ACN致大鼠脑组织损伤的机制之一。