【摘 要】
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目的为了了解安徽合肥地区普通人群和上海市男性性接触者（Men who have sex with men,MSM）人群的卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s Sarcoma-associated Herpesvirus,KSHV）感染情况,了解与KSHV感染有关的高风险因素,并且将两地区人群的血清KSHV阳性率作比较,为KSHV的控制与预防提供有力依据。方法（1）将目的基因ORF65C、ORF
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目的为了了解安徽合肥地区普通人群和上海市男性性接触者（Men who have sex with men,MSM）人群的卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s Sarcoma-associated Herpesvirus,KSHV）感染情况,了解与KSHV感染有关的高风险因素,并且将两地区人群的血清KSHV阳性率作比较,为KSHV的控制与预防提供有力依据。方法（1）将目的基因ORF65C、ORF73C和K8.1γ构建到带有His标签的p QE-80L表达载体上,将大量诱导表达的重组蛋白利用Ni-NTA通过竞争结合的方式进行纯化。纯化后的蛋白作为酶联免疫吸附（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）的抗原用于检测血清样本中的KSHV抗体,最后将检测的结果与统计的病人信息以及两个群体感染KSHV的阳性率利用SPSS 26.0进行回归分析,得到与感染KSHV相关的风险因素。（2）利用三种纯化后特定抗原量的重组蛋白对新西兰大白兔进行共六次免疫,其中两次皮下免疫,四次耳缘静脉免疫,最后心脏取血验证其免疫反应性及效价,得到相应的多克隆抗体。（3）利用含有KSHV基因组的i SLK.219细胞系通过巢式PCR扩增其K1基因的VR1区域,并在此基础上建立基于KSHV K1的分型方法。结果（1）成功构建了p QE-80L-ORF65,p QE-80L-ORF73和p QE-80L-K8.1三种重组基因,通过Ni-NTA琼脂糖纯化树脂对三种重组基因所表达的外源蛋白进行纯化,并得到了纯度较高的蛋白样品。（2）利用三种重组蛋白作为抗原测定病人血清内KSHV抗体,共收集有安徽合肥地区血清样本1009份,上海市闵行区MSM人群血清样本553份,分析得到安徽省合肥地区的人群所得血清样本中KSHV抗体阳性率为11.30%。在上海市闵行区,MSM人群所得血清样本中KSHV抗体阳性率为16.46%。（3）普通人群的KSHV抗体阳性率与MSM人群的KSHV抗体阳性率之间差异明显（95%CI,X~2=8.333,P=0.004）。对样本的回归分析得到患糖尿病与感染KSHV具有明显的相关性（OR=1.578,95%CI 1.072-2.323,P=0.021）,高脂血症与感染KSHV具有明显的相关性（OR=2.468,95%CI 1.345-4.526,P=0.004）,＞50岁的年龄组人群显示与感染KSHV具有明显的相关性（OR=2.533,95%CI 1.528-4.199,P＜0.001）,但结果显示性别、冠心病、高尿酸血症、低蛋白血症、高血压、恶性肿瘤、HIV、以及乙肝五项、职业、受教育程度、婚姻状况、如果未婚当前状况和每月收入情况等均没有明显的相关性（P＞0.05）。（4）成功制备了三种重组蛋白KSHV ORF65、ORF73和K8.1的多克隆抗体,验证三种纯化蛋白发生具有较强的免疫原性后,通过ELISA间接法检测得知三种多克隆抗体的效价分别为1:400,1:3200和1:1600。（5）建立了基于K1 VR1区域的KSHV分型方法。结论通过分析比较得到MSM人群感染KSHV的风险大于普通人群,且患糖尿病人感染KSHV（阳性率19.15%）的风险高于未患糖尿病人群（OR=1.578,95%CI1.072-2.323,P=0.021）,患高脂血症人群感染KSHV（阳性率28.07%）的风险高于未患高脂血症人群（OR=2.468,95%CI 1.345-4.526,P=0.004）,＞50岁年龄组人群感染KSHV（阳性率17.22%）可能会增加病毒感染风险（OR=2.533,95%CI1.528-4.199,P＜0.001）,提示患糖尿病、高脂血症、以及年龄大于五十岁人群都会在一定程度上提高感染KSHV的风险,但是患冠心病、高尿酸血症、低蛋白血症、性别、高血压、恶性肿瘤、HIV、乙肝五项以及职业、受教育程度、婚姻状况、如果未婚当前状况和每月收入情况等与感染KSHV均没有明显的相关性或没有统计学意义,提示可能不是影响其感染风险性的因素。
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