悬铃木树干高大，绿化效果好，叶片吸尘、杀菌，抗有毒气体和病虫害能力强，是世界著名的行道树，有“行道树之王”的美誉，因此，我国许多城市都有种植。但其果毛不仅污染环境，而且会引发呼吸系统及皮肤疾病，给居民的生活带来了极大的不便。为此，国内外学者曾进行了大量的研究工作，以期解决果毛污染问题。随着科学技术的发展，基因工程为解决这些问题提供了新的途径。 本试验研究了影响根癌农杆菌转化悬铃木的多种因素，优化了转化条件，建立了悬铃木遗传转化系统；筛选出了适宜悬铃木组培苗叶片DNA的提取方法；利用GUS报告基因和PCR技术检测了外源基因在转化植株中的表达，为遗传转化结果提供了分子生物学证据。实验结果如下： 1．制备了转化悬铃木的工程农杆菌。表达载体pBI121中整合了反义LEAFY基因，在反义LEAFY基因上有一HindⅢ酶切位点。通过碱裂解法提取质粒DNA，用HindⅢ和EcoRI对其进行酶切，切出了预期大小的DNA片段。将此质粒用冻融法导入根癌农杆菌LBA4404。PCR扩增显示反义LEAFY基因转入农杆菌中。 2．Ka和Cef等抗生素对悬铃木外植体再生的影响存在一定的差异。在幼芽生根和叶片分化培养基中分别加入质量浓度为15mg·L^-1和40mg·L^-1Ka，根和叶片愈伤组织、幼芽的诱导率均为0；在分化和生根培养基中分别加入质量浓度为500mg·L^-1和800mg·L^-1的Cef则可使愈伤组织、幼芽和根的诱导率为0。在叶片分化培养基中同时加入这2种抗生素，愈伤组织和幼芽诱导率为0的Ka+Cef组合的质量浓度为30mg·L^-1+400mg·L^-1。 3．优化了根癌农杆菌介导悬铃木的遗传转化体系。预培养9d的悬铃木叶片在OD₆₀₀值为0.7的根癌农杆菌菌液中浸染10min后，再在含有100μmol·L^-1的乙酰丁香酮的共培养培养基上黑暗条件下共培养3d叶片的遗传转化效率最高。该体系的建立为进行农杆菌介导外源目的基因培养悬铃木新品种奠定了基础。 4．筛选出了悬铃木遗传转化过程中抑制愈伤组织褐化的物质及其质量浓度。在DTT、PVP和AC3种物质中以0.08mg·L^-1的DTT抑制褐化最有效，褐化率为19％；质量分数为0.1％的AC次之，褐化率为27％；质量浓度为2000mg·LL^-1的PVP褐化率最高为48％。其它因素中，以10℃、光照强度为2500lx条件下褐化率达12％，效果最理想。 5．筛选出了悬铃木组培苗叶片提取DNA的方法。在SDS-Ⅰ、SDS-Ⅱ、CTAB-Ⅰ和CTAB-Ⅱ提取叶片DNA的4种方法中，CTAB-Ⅱ法为DNA提取的最佳方法。 6．通过含一定浓度Ka的选择培养基对悬铃木外植体进行再生培养筛选，淘汰部分不具备Ka抗性的白化外植体。对筛选出的再生植株通过组织化学染色法检测GUS活性，结果在转基因植株的组织中检测到蓝色。PCR特异扩增的分子生物学检测结果也表明外源目的基因反义LEAFY整合入了悬铃木基因组中。本试验获得了一批转基因悬铃木植株，这为后期在生产水平上选育出无球果的转基因悬铃木品种奠定了基础。