背景:据2020年最新癌症数据显示,乳腺癌已成为全球第一大癌症。探索更多标记物来预测肿瘤进展和疗效正变得越来越重要。由于多种类型的细胞均可产生外泌体,而肿瘤细胞衍生的外泌体可影响癌细胞的定植、远处转移和耐药性。Lnc RNA作为长度大于200个核苷酸的RNA,不具备翻译蛋白质的功能,但可发挥多种生物学功能。研究发现,肿瘤细胞分泌的外泌体携带的lnc RNA有着调节肿瘤进展的作用。Lnc RNA LSINCT5已经被确认在不同肿瘤中存在高表达的情况,可通过多种调节机制显示出促癌活性。然而,仍不确定lnc RNA LSINCT5在乳腺癌中的参与机制。目的:明确lnc RNA LSINCT5在临床乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达情况,证实lnc RNA LSINCT5可经外泌体传递至周围细胞,并阐明外泌体lnc RNA LSINCT5在乳腺癌进展中的作用机制。验证lnc RNA LSINCT5通过抑制HMGA2蛋白降解来调节乳腺癌进展的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测lnc RNA LSINCT5在乳腺癌组织及MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231细胞中的差异表达。聚乙二醇沉淀法结合试剂盒纯化法提取三种细胞培养上清中的外泌体。透射电镜、纳米颗粒跟踪分析及Wester n blot对外泌体进行粒径分析和表面标志物鉴定,荧光显微镜观察MCF-10A细胞摄取外泌体的情况。用si RNA特异性下调三种细胞中的lnc RNA LSINCT5和HMG A2的表达,慢病毒包被的lnc RNA LSINCT5用于过表达目的基因。对三种细胞进行以下分组:NC组,si-LSINCT5组和过表达LSINCT5组,CCK-8分析细胞活力;伤口愈合实验检测细胞迁移;Transwell评估细胞侵袭;q PCR和Western blot分析E-钙粘蛋白,N-钙粘蛋白,波形蛋白和HMGA2的m RNA和蛋白表达水平。对MD A-MB-231细胞进行分组:NC组,si-LSINCT5组,NC+MG132组和si-LSINCT5+MG132组,Western blot检测HMGA2的蛋白表达。对MDA-MB-231细胞进行si-L SINCT5和过表达LSINCT5处理后,泛素化实验检测HMGA2蛋白的降解情况。结果:本研究发现,与癌旁组织相比,临床乳腺癌组织中lnc RNA LSINCT5表达上调;与正常乳腺上皮细胞相比,乳腺癌细胞中lnc RNA LSINCT5同样高表达。经过对外泌体的提取鉴定,可见典型的圆形或扁圆形的外泌体,外泌体粒径多分布在30150 nm,外泌体表面标志物CD9、flotillin-1亦呈阳性表达,并且细胞可成功摄取外泌体。过表达或沉默lnc RNA LSINCT5对细胞活力并无促进或抑制作用。过表达lnc RNA LSINCT5增强了乳腺癌细胞的迁移和侵袭的能力,干扰lnc RNA LSINCT5的表达减弱了乳腺癌细胞的迁移和侵袭的能力。同时,过表达lnc RNA LSINCT5后细胞分泌的外泌体也增强了正常乳腺上皮细胞的迁移和侵袭的能力,干扰lnc RNA LSINCT5表达后细胞分泌的外泌体减弱了正常乳腺上皮细胞的迁移和侵袭的能力。Lnc RNA LSINCT5的下调可导致E-钙粘蛋白表达降低,而N-钙粘蛋白、波形蛋白表达增高,从而抑制了上皮间质转化。过表达lnc RNA LSINCT5后,促进了上皮间质转化。HMGA2是介导乳腺癌细胞迁移和侵袭的重要信号分子之一,本研究发现,在RNA水平上,HMGA2的表达不受lnc RNA LSINCT5影响,但下调l nc RNA LSINCT5的表达抑制了HMGA2的蛋白水平,过表达lnc RNA LSINCT5增加了HMGA2的蛋白水平。使用蛋白酶体抑制剂后,恢复了沉默lnc RNA LSINCT5表达导致的HMGA2蛋白水平的降低,同时过表达lnc RNA LSINCT5抑制了HM GA2的泛素化水平,从而抑制了HMGA2蛋白的降解,随后影响了EMT相关蛋白的表达。结论:我们的数据揭示了外泌体传递的lnc RNA LSINCT5的致癌活性,并突出了LSINCT5-HMGA2-EMT途径在乳腺癌中的作用机制。