论文部分内容阅读
背景：研究表明，褪黑素具抗氧化、清除体内自由基、增强机体免疫力和抗肿瘤等多种重要的生理及药理作用，是体内最强大的抗自由基物质之一。体外研究发现MT可保护神经元的诱导性损伤，抑制β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)降解为有毒性的β-淀粉样蛋白(Aβ)片段。有人用于治疗阿尔茨海默病(Alzheimersdisease，AD)，发现可延缓有关症状的进一步恶化。AD是一种以进行性认知障碍、记忆力减退、老年班(SP)形成、神经纤维缠结(NFT)和神经元丢失为特征的中枢神经系统退行性疾病。早期脑内变化以Aβ沉积及SP形成为主，中枢神经系统神经元及突触丢失并不明显，晚期由于Aβ所致的神经元凋亡，神经纤维变性、胶质细胞增生活化等又可反过来促进Aβ的沉积和SP形成，形成恶性循环，促使AD病人病程进行性加重。因此，从中年起使用MT是否可以阻抑AD的发生，发挥对AD的预防性治疗作用?用于老年AD患者是否可以改善或者逆转已发生的病理改变?值得探讨。
目的：对中年、老年快速老化鼠(SAMP8)分别给予MT干预4个月，观察其行为学方面及学习记忆相关脑区的变化，探讨MT对AD不同发病阶段的影响及其机制。
方法：SAMP8鼠30只，雌雄不限，随机分为三组：中年治疗组(4月龄开始MT1mg/Kg·d皮下注射)、老年治疗组(7月龄开始MT1mg/Kg·d皮下注射)均干预4个月，对照组无任何处理。各组动物均在11月龄次日进行跳台实验、Y型迷宫及八臂迷宫等行为学测试，然后处死取脑组织冰冻切片，分别进行Gomori六胺银法染色、尼氏染色、ChAT免疫组织化学实验、ACh酶组织化学实验。观察海马CA1区六胺银法染色颗粒(MSSG)的形态与分布；海马CA1区、CA3区锥体细胞层神经元的数量；基底前脑ChAT阳性神经元的形态与分布；皮质、海马CA1及齿状回AchE阳性纤维的形态与分布。另外取腹侧海马的超薄切片，做透射电镜观察CA1区锥体细胞层神经元的超微结构。所得数据结果均用(-x±s)表示，用SPSS统计软件的方差分析进行组间、组内显著性比较，当差别有显著性意义时再用Student-Newman-Keuls检验进行两两比较。
结果：行为学测试，小鼠跳台实验的逃避潜伏期，中年治疗组和老年组治疗组均比对照组明显缩短，差异具有显著性意义(P＜0.05)。Y型迷宫实验中，各组动物的逃避潜伏期差异不明显(P＞0.05)；24h后逃避刺激正确的次数，中年和老年治疗组均比对照组增加，差异具有显著性意义(P＜0.01)。八臂迷宫试验中，逃避潜伏期各组之间差异不明显(P＞0.05)；24h后逃避潜伏期，中年治疗组比老年治疗组明显缩短，差异具有显著性意义(P＜0.05)。
海马CA1区MSSG，中年治疗组的簇数及颗粒数与其他两组相比差异不明显(P＞0.05)；颗粒面积较其他两组均明显减少，分别与之相比差异具有显著性意义(P＜0.01)。海马锥体细胞层神经元，形态上可见中年治疗组CA1区及CA3区的神经元呈圆形或椭圆形，排列整齐紧凑；数量上与对照组相比明显较多，差异具有显著性意义(P＜0.05)。中年治疗组CA3区神经元数量与老年治疗组相比也明显增加，差异具有显著性意义(P＜0.05)。基底前脑部位隔内侧核(MS)、斜角带垂直支(VDB)的ChAT阳性神经元各组相比差异不明显(P＞0.05)。海马CA1区的AChE阳性神经纤维数量，中年治疗组比老年治疗组增多，差异具有显著性意义(P＜0.05)。
海马CA1区锥体细胞层神经元的线粒体，体积密度Vv，各组相比差异不明显(P＞0.05)；表面积密度Sv，中年治疗组明显较老年治疗组大，差异具有显著性意义(P＜0.05)；数密度Nv变化类似Sv，中年治疗组较老年治疗组明显增加，差异具有显著性意义(P＜0.05)；比表面δ，中年治疗组稍高于老年治疗组，差异具有显著性意义(P＜0.05)，老年治疗组明显低于对照组，差异具有显著性意义(P＜0.01)；平均体积V，中年治疗组明显低于老年治疗组，差异具有显著性意义(P＜0.05)。海马CA1区锥体细胞层的突触，中年治疗组的Nv比对照组明显增多，差异具有显著性意义(P＜0.05)。
结论：MT可改善SAMP8鼠的学习记忆障碍，对海马CA1区淀粉样颗粒具有一定的清除功能，能够减少海马锥体细胞层的神经元及其突触的丢失，保护线粒体，对基底前脑ChAT阳性神经元的影响不明显，但能使海马AChE阳性纤维的丢失减少，对中年SAMP8鼠的作用更加明显。因此，本实验认为MT能够改善SAMP8鼠的学习记忆相关脑区的功能，对中年SAMP8鼠的影响更加显著，具有年龄差异。