GmAOC3和GmMYC5转化大豆的初步研究

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大豆[Glycine max(L.)Merr.]是一种重要的经济和油料作物,但虫害却严重影响其成长和发育,使大豆产量和质量严重降低。茉莉酸(JA)作为一种植物激素,在植物的胁迫防御反应中发挥着重要作用。在茉莉酸生物合成途径中,丙二烯氧化物环化酶(AOC)发挥着重要作用,其决定了JA的立体异构型和生物活性。转录因子在植物胁迫中发挥重要的作用,在不利条件下,它们合成、传输和放大信号,进而调节下游基因的表达。遗传转化技术可以生产新颖和创造遗传多样性的植物材料,为育种另辟蹊径,因而在植物改良中有重要作用。所以,利用转基因技术将具有抗虫等作用的优良基因导入大豆中,使其稳定表达,这对大豆抗虫种质资源的增加具有重要意义。  本实验首先利用双酶切-连接的方法将吴倩(2011)和丁长文(2011)证明有抗虫功能的基因GmAOC3和GmMYC5重新构建植物表达载体pBA002-GmAOC3和pBA002-GmMYC5,其中含有筛选基因bar。再利用农杆菌介导法将其转入大豆中,实验结果显示,单个事件转化率为0~7.12%,总的转化率分别为0.4%和0.3%,美国品种Jack优于南农88-1,而且整个子叶节的出芽率和转化率均高于子叶节。T0代共收获22株转化苗,经PCR和bar试纸条检测阳性植株为5株,其中4株Jack,1株南农88-1。利用PCR法、bar试纸条法和草丁膦叶片涂抹法检测T1代转化植株,共获得转GmAOC3大豆6株,转GmMYC5大豆1株。定性PCR法主要检测标记基因bar、35S+目的基因部分片段、35S+目的基因+NOS-T。实验还得出草丁膦的适宜涂抹浓度为150mg/L。  转GmAOC大豆叶片半定量分析表明GmAOC3在转基因Jack中表达量明显高于非转基因植株,表明在35S强启动子作用下目的基因得到了高效表达,而在转基因南农88-1中却没有提高,可能是植物体内复杂的调控网络导致的。转基因植株中,与茉莉酸代谢相关的基因表达趋势不明显,因而还有待进一步研究。转基因植株荧光定量分析表明,bar基因多为单拷贝,少数为双拷贝。斜纹夜蛾自由取食实验和自然条件下大豆植株叶片、豆荚等虫害情况初步证明GmAOC3有抗虫功能。因此该转基因株系可作为育种对象,进行下一步研究。
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