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帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的中老年神经退行性疾病,临床表现为静止性震颤、肌张力增高、运动迟缓等。虽然PD已有近二百年的研究历史,迄今为止,由于PD的发病机制不明,因此,临床上尚无有效的治愈PD的方法。根据Braak提出的PD脑内病理进展6级分级学说,黑质病变已经是到达疾病病理阶段的第三或第四阶段,因此,临床上,通过运动症状的改变诊断的PD病人已经到达疾病的中晚期。如果能在早期诊断PD,即在运动症状出现之前诊断PD,并采取适当的神经保护治疗方案,必将对延缓多巴胺能神经元的进一步退行性变和延缓疾病的进展具有重要的意义。而研究已证实,对于散发性PD病人,在出现运动症状之前,往往会出现一些非运动症状,如便秘、嗅觉丧失等症状。而PD中最先受累的核团包括嗅球和迷走神经背侧运动核(dorsal motor nucleus of vagus nerve, DMV)。DMV是调节胃肠道运动和分泌功能的最重要的中枢核团之一,其病理改变可能是导致PD病人出现上述的非运动系统症状的原因之一。因此,如果能在血液中找到一种检测指标,间接反映脑内核团的早期病变,将对PD的早期诊断、早期治疗和运动外症状的治疗具有重要的临床应用价值。Ghrelin是1999年由Kojima等人首先从大鼠胃黏膜细胞中发现的含28个氨基酸残基的多肽,是生长激素促分泌素受体唯一的内源性配体,主要由胃底的X/A样细胞分泌,ghrelin主要有两种分子形式,即第三位丝氨酸辛酰化(active ghrelin)和第三位丝氨酸非辛酰化ghrelin。除了胃肠道分泌外,在下丘脑、肠、肾等部位也有少量分泌,但循环系统的ghrelin大部分来源于胃,其表达调控受多种因素的影响,进食、肥胖等因素都可通过中枢机制或旁分泌机制导致血液中ghrelin水平的变化。Ghrelin的合成和分泌主要受中枢神经系统DMV的胆碱能神经元支配,而DMV恰巧是PD早期受累的核团之一,因此DMV的病变可能会影响血浆ghrelin的水平,而因此血浆ghrelin的水平可能会成为PD中DMV神经元功能损伤的外周标记物。本研究在携带人突变型α-synuclein(A53T)转基因小鼠及与其相对应的野生型小鼠(WT)上,用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定不同年龄(1月龄,3月龄,6月龄,9月龄,12月龄)的雌雄鼠血浆中ghrelin的水平,并应用尼氏染色法和免疫组织化学方法,分别观察上述动物延髓DMV神经元和胆碱能神经元数量的变化,以期在这种PD转基因小鼠中,观察疾病的不同进展过程中血浆中ghrelin水平的变化,并分析引起这种变化的可能机制。结果如下：1.在3月龄,6月龄,9月龄PD转基因雌鼠中,血浆的总ghrelin(total ghrelin)的水平分别降低了13%,22%和25%,与对照组相比,差别有统计学意义。而1月龄和12月龄的PD转基因雌鼠,血浆total ghrelin的水平却未观察到变化。2.在3月龄,6月龄,9月龄PD转基因雄鼠中,血浆total ghrelin水平分别降低了18%,60%和23%,与对照组相比,差别有统计学意义。而1月龄和12月龄的PD转基因雄鼠,血浆中total ghrelin水平却未观察到变化。3.在3月龄,6月龄,9月龄PD转基因雌鼠中,血浆有活性的ghrelin(active ghrelin)的水平分别降低了24%,68%和32%,与对照组相比,差别有统计学意义。1月龄PD转基因雌鼠血浆中active ghrelin的水平升高了10%,与对照组相比,差别有统计学意义。12月龄的PD转基因雌鼠血浆中active ghrelin的水平未观察到变化。4.在3月龄,6月龄,9月龄,12月龄PD转基因雄鼠中,血浆active ghrelin的水平分别降低了28%,58%和39%,与对照组相比,差别有统计学意义。1月龄PD转基因雄鼠血浆中active ghrelin的水平升高了21%,与对照组相比,差别有统计学意义。12月龄PD转基因雄鼠血浆中active ghrelin的水平未观察到变化。5.在9月龄PD转基因雌鼠DMV区神经元和胆碱能神经元的数量分别减少了12.46%和12.30%,与对照组相比,差别有统计学意义。而3月龄,6月龄和12月龄PD转基因雌鼠,DMV区神经元和胆碱能神经元的数量未观察到变化,差别无统计学意义。在12月龄野生型雌鼠中,DMV区神经元和胆碱能神经元的数量比3月龄的分别减少了51.28%和22.63%,差别均有高度统计学意义；在12月龄PD转基因雌鼠中,DMV区神经元和胆碱能神经元的数量比3月龄的分别减少了41.92%和34.89%,差别均有高度统计学意义。6.在6月龄PD转基因雄鼠DMV区神经元和胆碱能神经元的数量分别减少了20.31%和4.06%,与对照组相比,差别有统计学意义。在9月龄PD转基因雄鼠DMV区神经元和胆碱能神经元的数量分别减少了9.88%和11.06%,与对照组相比,差别有统计学意义。而3月龄和12月龄PD转基因雄鼠DMV区神经元和胆碱能神经元的数量未观察到变化,差别无统计学意义。在12月龄野生型雄鼠中,DMV区神经元和胆碱能神经元的数量比3月龄的分别减少了45.04%和18.03%,差别均有高度统计学意义：在12月龄PD转基因雄鼠中,DMV区神经元和胆碱能神经元的数量比3月龄的分别减少了52.50%和24.88%,差别均有高度统计学意义。上述结果表明,在PD疾病早期,即可观察到血浆ghrelin水平的下降,且伴有脑内延髓DMV区神经元和胆碱能神经元数量的降低,说明在这种PD转基因小鼠中,脑内的病变首先发生在脑干,然后再蔓延至中脑,DMV区胆碱能神经元受累,导致其功能的降低,从而使ghrelin的合成和释放降低,表现为血浆ghrelin水平的降低。本课题为血浆ghrelin水平可能作为PD早期诊断的血液学检测指标之一提供了可靠的实验依据。