卵巢癌是女性生殖器官常见肿瘤，发病率在妇科恶性肿瘤中列居第三，但其致死率却为各类妇科肿瘤之首。当前，卵巢癌的治疗手段主要包括手术、化疗、放疗、免疫治疗、物理治疗等，这些方法的基本思路是把肿瘤看作是一个均质性整体，以减少肿瘤细胞的数量，最大限度清除肿瘤病灶为目的。但是部分肿瘤细胞对化疗、放疗的抵抗从而造成肿瘤的复发是肿瘤治疗的主要障碍。因此，探索卵巢癌发病机制，寻找其治疗的新途径，已成为进一步提高卵巢癌患者生存率的关键。 随着干细胞（Stem Cells，SC）研究的深入，人们发现肿瘤是一种干细胞疾病。研究显示，肿瘤组织中存在极少量的肿瘤干细胞（Tumor Stem Cell，TSC）或癌干细胞（Cancer Stem Cell，CSC），具有无限增生的潜能，对化疗、放疗具有抗性，在肿瘤中充当干细胞的角色，是肿瘤发生、发展、侵袭、转移、复发及耐药的决定性因素。以往对卵巢癌复发和转移的研究忽视了CSC的存在及其重要性。由于CSC的存在，现有治疗方法不能有效抑制卵巢癌发生、转移、耐药以及复发。目前，从形态学上很难区分CSC与肿瘤细胞间的差异，只能用功能学方法即对其自我更新能力和分化潜力来鉴定CSC。现分离CSC的方法主要有三种：侧群（side population，SP）细胞分选法、无血清培养富集干细胞及通过CSC表面特异性标志筛选。其中SP细胞是指可将荧光染料Hoechst33342泵出细胞外，表现弱荧光信号的细胞群，占总体细胞的很少部分。多项研究表明，部分肿瘤（乳腺癌、前列腺癌、脑胶质瘤等）中SP细胞具有CSC特性，表现为：表达SC相关表面标志、具有自我更新能力、强致瘤能力、高表达转运蛋白ABCG2等。因此，我们利用SP细胞与SC、CSC具有许多共性的特点来富集分离CSC。在缺乏显著的CSC分子标记的情况下，SP细胞的筛选分析，可以作为CSC鉴定的一种实用而简易的重要方法之一。 本研究选择人卵巢癌细胞系A2780为研究对象，对其内的SP和Non-SP细胞作细胞生物学特性鉴定，判断SP细胞分选法能否作为分离卵巢CSC的一种有效方法。随后在SP细胞研究的基础上探讨ABCG2分子能否作为卵巢CSC表面特异性标志。 目的： 基于SP细胞分选法，鉴定A2780细胞株中SP细胞是否具有CSC特性，判断SP细胞分选法能否作为分离卵巢CSC的一种有效方法。在SP细胞研究的基础上，探讨ABCG2分子阳性细胞的生物学特性，判断ABCG2分子是否为卵巢CSC表面特异性分子标志。最后模拟体内环境对鉴定的具有耐药性的细胞进行药敏实验，筛选出敏感的化疗药物，为临床靶向治疗卵巢癌提供一定的指导。 方法： 1．基于FACS分选技术检测并分选A2780细胞株中SP和Non-SP细胞。 2．SP和Non-SP细胞相关细胞生物学特性研究。分别从细胞增殖活性、体外克隆形成能力、裸鼠体内致瘤性、对化疗药物的耐受性及ABCG2分子表达水平这几方面综合鉴定卵巢癌中SP细胞与CSC的相关性。 3．免疫磁选技术分离获取ABCG2分子阳性和阴性表型细胞。 4．ABCG2分子阳性和阴性细胞相关细胞生物学特性研究。分别从细胞增殖活性、体外克隆形成能力、体内致瘤性、SP细胞表达情况、对化疗药物的耐受性及利用单抗封闭后阳性细胞的耐受性等方面综合分析ABCG2分子在卵巢CSC中的作用。 5．在模拟体内环境的三维培养基中对ABCG2分子阳性和阴性的细胞进行药敏实验，筛选出对卵巢癌中ABCG2分子阳性细胞敏感的化疗药物。 结果： 1．FACS分选技术检测出A2780细胞株中SP细胞比例约为2．6％，将FACS图中门区域的细胞分选下来，从1×107细胞中可得到约2×105个SP细胞。 2．对SP和Non-SP细胞进行相关细胞生物学特性研究，结果显示：SP细胞在普通培养基上细胞增殖活力、在平板和软琼脂内的克隆形成能力均显著高于Non-SP细胞；SP细胞在Balb/c裸鼠体内的致瘤能力、对化疗药物长春新碱的耐受性均显著高于Non-SP细胞；SP细胞中ABCG2分子的表达量也显著高于Non-SP细胞。 3．利用免疫磁选技术分离获取A2780细胞中ABCG2分子阳性表型细胞，1×107的A2780细胞可得到约2×105的ABCG2分子阳性细胞，即A2780细胞中ABCG2分子阳性表型细胞约占2％左右，其含量与SP细胞的比例相似。 4．对ABCG2分子阳性和阴性表型细胞进行相关细胞生物学特性研究，结果显示：ABCG2分子阳性细胞普通培养基上的细胞增殖活力、在体外克隆形成能力、体内致瘤能力仅略高于ABCG2分子阴性细胞，但差异无统计学意义；ABCG2分子阳性细胞中SP细胞含量明显高于Non-SP细胞；ABCG2分子阳性细胞对化疗药物的耐受性明显高于ABCG2分子阴性细胞，用ABCG2分子的单克隆抗体封闭ABCG2分子阳性细胞后其细胞耐受性明显降低。 5．在三维培养基中发现ABCG2分子阳性细胞对紫杉醇的敏感性明显高于顺铂及阿霉素。紫杉醇较低剂量时就可明显抑制ABCG2分子阳性细胞的增殖。 结论： 1．A2780细胞株中SP细胞的细胞生物学特性基本符合CSC。表明SP细胞能有效富集CSC，可作为分离鉴定卵巢CSC的一种有效方法。 2．SP细胞中高表达的ABCG2分子参与维持SP细胞的强耐药性，可能是卵巢CSC表面特异性标志之一。ABCG2分子可作为靶向治疗卵巢癌中耐药细胞的靶分子，一定程度上逆转肿瘤的多药耐药性。 3．紫杉醇对卵巢癌细胞中ABCG2分子阳性细胞的抑制性明显高于顺铂和阿霉素这两种卵巢癌常规化疗药物。