【摘 要】
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乳脂肪以球状形式分散在乳汁中,称为乳脂肪球（MFG）,其外包裹着一层含有蛋白和磷脂的膜结构,称为乳脂肪球膜（MFGM）。乳脂肪球膜上的蛋白的组成和含量受到物种、泌乳时期和营养等因素的影响。本研究采取共轭亚油酸（CLA）饲喂正常泌乳的荷斯坦奶牛,取其牛乳进行乳成分和乳脂肪球粒径分析,提取MFGM蛋白进行蛋白组学分析,并通过细胞试验探究提取的乳脂肪球膜蛋白对乳腺上皮细胞脂滴形成的影响,为理解乳脂肪球膜
【基金项目】
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国家自然科学基金-河南省联合基金（U1904116）；
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乳脂肪以球状形式分散在乳汁中,称为乳脂肪球（MFG）,其外包裹着一层含有蛋白和磷脂的膜结构,称为乳脂肪球膜（MFGM）。乳脂肪球膜上的蛋白的组成和含量受到物种、泌乳时期和营养等因素的影响。本研究采取共轭亚油酸（CLA）饲喂正常泌乳的荷斯坦奶牛,取其牛乳进行乳成分和乳脂肪球粒径分析,提取MFGM蛋白进行蛋白组学分析,并通过细胞试验探究提取的乳脂肪球膜蛋白对乳腺上皮细胞脂滴形成的影响,为理解乳脂肪球膜蛋白的组成在乳脂肪球粒径大小过程中的调节作用奠定基础。（1）动物试验:试验首先选取16头健康体况近似的荷斯坦奶牛,对照组（CON组）正常饲喂,试验组（CLA组）每只牛饲喂350 g/d的CLA,饲喂10天,分别在0、2、4、6、8、9和10天分析奶牛生产性能,采集牛乳进行乳成分测定,采用马尔文激光粒度仪对乳脂肪球粒径大小进行测定,在第10天采集牛乳进行蛋白组学分析,采用Western blot进行验证。结果表明随着CLA饲喂天数的增加,两组奶牛的乳产量、乳蛋白和乳糖含量没有显著影响,乳脂肪含量、乳脂肪球粒径D[3,2],D[4,3],以及粒径参数Dv（10）,Dv（50）,Dv（90）和Dv（100）会随着饲喂天数增加呈现显著降低（P＜0.05）。每天取两组牛乳利用稀释计数法对乳脂肪球数量进行计数,发现随着CLA饲喂时间的增加,乳脂肪球数量也有显著降低的趋势（P＜0.05）。取对照组和试验组第10天的牛乳样品提取MFGM蛋白,经SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳之后,证实MFGM蛋白的提取成功,通过i TRAQ蛋白组学定量技术对两种牛乳进行测定分析,得到乳脂肪球膜蛋白的组成表达谱,筛选其中的差异蛋白,并进行GO和KEGG富集分析,获得差异表达膜蛋白,发现与对照组相比CLA组的FABP3、XDH和PLIN2分别下降0.89、0.82和0.77倍（P＜0.05）,MUC15、VLDLR和MFG-E8分别增加1.59、1.36和1.17倍（P＜0.05）。然后选取BTN、XDH和PLIN2蛋白进行Western blot验证蛋白表达量,结果与蛋白组学的结果相类似,表明MFGM蛋白的组成对乳脂肪球粒径大小发挥调控作用。（2）细胞试验:体外培养奶牛乳腺上皮细胞MAC-T,分别进行以下处理:对照组为LA+CON-MFGM组（100μm亚油酸+100μg/m L CON-MFGM蛋白）、试验组为LA+CLA-MFGM组（100μm亚油酸+100μg/m L CLA-MFGM蛋白）,处理过后的细胞采用油红O染色脂滴并测量脂滴直径大小和比例,结果发现与CON组MFGM蛋白处理的乳腺上皮细胞脂滴大小1.07μm相比,CLA组MFGM蛋白处理的脂滴直径增加到1.33μm（P＜0.05）。分析脂滴大小比例发现,CLA组MFGM蛋白处理使细胞的小脂滴（size＜1μm）比例减少,大脂滴（size＞3μm）比例增加。
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