植物病毒病是农作物的重要病害之一。目前,抗植物病毒剂的防治效果或安全性还不理想,远远不能满足农业的需求,急需开发新型抗病毒制剂。尽管化学农药现在仍占主体,但从可持续发展的角度考虑,发展能产生高效、高活性的生物源抗病毒剂是实现产业化生物防治中的关键任务。对我国来说,微生物来源的生物化学农药是生物农药发展的主体。本研究首先从春季及夏季烟草的病、健叶、种子及土壤中共分离到127个菌株,摇瓶发酵后,分别取发酵液,室内经半叶法测定其对烟草普通花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus, TMV)的拮抗作用,得到一个对TMV有很强拮抗活性的细菌菌株,根据生理生化特性和16S rDNA序列鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),命名为CZ,其抑病毒率可达96.73%。初步确定该菌株发酵液中的抗病毒活性物质为蛋白质,命名为CZp。并对拮抗细菌CZ产生活性物质的摇瓶发酵条件进行了初步研究。研究表明,CZ菌株适宜的摇瓶发酵条件是:NB培养基、初始pH8.0、通气量30ml/100ml、发酵温度25℃、发酵时间60h。同时,本研究对活性蛋白CZp进行了分离纯化。利用硫酸铵分级沉淀获得粗提蛋白,并通过紫外(波长220～340nm)扫描,该物质在280nm处有紫外吸收峰,进一步确定其为蛋白类物质。发酵液经硫酸铵粗沉淀及预处理后,采用离子交换层析和分子筛层析等方法对活性物质进行了纯化,经SDS-PAGE测定其亚基的相对分子质量为13.5kD,并对其部分理化特性进行初步分析。结果表明:拮抗活性蛋白CZp稳定性较好,对酸、碱较敏感,不能忍受强酸强碱的环境条件;对温度不十分敏感,但是不能忍受长时间的持续高温;对光照不敏感,但随着光照时间的增长,活性略有下降;对蛋白酶K和胰蛋白酶均不敏感,用两种酶处理后,仍能保持原有的活性。此外,本研究以枯斑三生烟(Nicotiana tabacum var.samsun NN)和普通烟(Nicotiana tabacum var.NC89)为寄主材料,以TMV为供试毒源,从生理生化的角度初步探索了活性蛋白CZp对TMV的作用机理,主要得到以下结果:CZp具有抑制TMV在烟草体内复制增殖的能力。叶圆片法试验结果表明,研磨接种后,在CZp粗提液中悬浮的圆片比在蒸馏水中悬浮的枯斑数降低89.19%,说明CZp对病毒在烟草体内的复制增殖有一定的抑制作用。CZp具有诱导寄主对TMV产生系统抗性的能力。用CZp对枯斑三生烟下部叶片进行诱导处理(清水处理作对照),然后在其上部叶片接种TMV。结果表明,CZp可以诱导枯斑三生烟对TMV产生系统抗性,其中以诱导处理第4天的枯斑抑制率为最高,可达81.76%,枯斑出现时间推迟10h以上。以CZp处理NC89烟12h后,摩擦接种TMV。第1天、5天、8天、12天、16天分别取各处理叶片测过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性。结果发现CZp能够诱导普通烟叶片中的POD及PAL等细胞防御酶活性增强。第1天、5天、8天、12天、16天分别取各处理叶片测定NC89叶片中丙二醛(MDA)和叶绿素的含量。结果表明,经CZp处理的NC89烟叶片内MDA的含量降低,而叶绿素的含量增高。电镜观察结果表明CZp能打破TMV粒体的规则排列,与TMV粒体不可逆的结合,从而降低其侵染能力。