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目的:寻找一种新的有效、可行、副作用小的结肠癌治疗方法,将在很大程度上改变结肠癌患者的治疗现状,MicroRNA (miRNA)是一类存在于病毒和高等生物中,进化上高度保守的内源性非编码RNA。miRNA广泛参与调控包括个体生长发育、细胞凋亡、增殖及分化在内的许多生命过程,已在多种肿瘤中发现miR-124家族表达异常。本课题拟研究miR-124通过靶向调控iASPP抑制结肠癌细胞增殖的功能学效应,以期为寻找结肠癌的防治靶标提供坚实基础。方法:1、所有组织标本均取自结肠癌手术患者,其中18例来自男性,22例来自女性,患者手术前未行放疗及化疗,年龄35-76岁,平均年龄50.27岁。按UICC和AJCC2012年结肠癌的TNM分期和临床分期,Ⅰ期11例,Ⅱ期9例,Ⅲ期20例。对照组取同一手术标本的癌旁组织(以距肿瘤5cm组织为癌旁组织)2、选取人结肠上皮细胞为对照,选取三株结肠癌细胞作为实验组,QPCR技术检测iASPP以预测miRNA在结肠癌组织和结肠癌细胞中的表达3、利用miR-124模拟物以及iASPP-shRNA转染结肠癌SW480和HT29细胞,Western blot检测iASPP和NF-кB的表达,接着过表达iASPP,回复miR-124影响iASPP和NF-кB表达的效应;4、利用双荧光素酶报告基因进一步验证miR-124对iASPP的靶向调控作用;5、构建miR-124慢病毒载体,感染SW480和HT29细胞,用MTT、Brdu和克隆形成方法检测miR-124对SW480和HT29细胞增殖的影响,接着过表达iASPP,回复miR-124对SW480和HT29细胞的生物学效应。结果:1、可能靶向调节iASPP的miRNAs有1miR-124、miR-506、 miR-19a/b、miR-182;组织水平QPCR结果显示,在各个预测靶向调控iASPP的miRNAs中,miR-124在结肠癌组织中特异低表达;细胞水平QPCR结果显示,miR-124/miR-506在结肠癌细胞中特异低表达,且在SW480和HT29中最为明显;2、miR-124模拟物和iASPP-shRNA转染SW480和HT29细胞,miR-124过表达或者iASPP被沉默,iASPP表达显著抑制,NF-кB表达上调;当转染iASPP ORF克隆后,iASPP过表达可回复miR-124对iASPP和NF-кB的调控作用;3、构建miR-124慢病毒载体,感染SW480和HT29细胞,GFP荧光图片显示,感染效率在80%以上。细胞功能学结果显示miR-124过表达以及iASPP被沉默可显著抑制细胞增殖能力。结论:1、软件预测靶向调控iASPP的各个miRNAs中miR-124在结肠癌组织和细胞癌细胞中特异低表达;2、miR-124可靶向调节iASPP的表达,且可上调NF-кB的表达;3、miR-124过表达或者iASPP被沉默可显著抑制结肠癌细胞的增殖能力;4、由上述结果可得,miR-124可通过靶向调控iASPP抑制结肠癌细胞的增殖能力。