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本论文分三部分,初步研究了白介素-6(IL-6)/gp130信号通路与Graves病(GD)的关系。
第一部分GD患者血清IL-6水平变化[目的]研究GD患者经抗甲亢药物治疗前后不同时期血清IL-6水平变化情况。
[材料与方法]1.对象及分组26例GD患者,其中有13例为初发期未治疗组病人,追踪随访至其抗甲亢治疗维持期,另外13例为抗甲亢停药后的GD病人,正常对照组为13例健康志愿者。
2.血清IL-6的测定空腹状态下采外周静脉血,离心取血清。采用酶联免疫吸附法(ELISA)对血清IL-6进行测定
3.统计学分析结果以均数±标准差(-x±s)表示。初发期组与维持期组采用配对t检验。其他各组间比较采用方差分析。p<0.05为差别有统计学意义。
[结果]GD初发期患者其血清IL-6水平(2.52±1.30pg/ml)较对照组(1.44±0.59pg/ml)明显升高,差异具有统计学意义(P=0.009);用药治疗至维持期血清IL-6水平下降至1.53±0.96pg/ml,与初发期组相比差异有统计学意义(P=0.002);维持期组与对照组IL-6水平比较无显著性差异;停药组病人IL-6水平回升(2.42±1.07pg/ml),与初发期组无显著性差异,高于维持期组病人和正常对照组水平(P均<0.05)。
[结论]GD患者血清IL-6水平变化规律:初发期明显升高,应用抗甲状腺药物治疗至维持期浓度下降,但至停药期可能由于免疫损伤原因IL-6水平回升。
第二部分Graves病外周血单个核细胞gP130mRNA的表达[目的]研究GD患者外周血单个核细胞(PBMCs)内gp130mRNA在抗甲亢药物治疗前后不同时期的表达情况。
[材料与方法]1.对象及分组同第一部分。2.PBMCs内gp130mRNA表达的检测空腹采集外周静脉血密度梯度离心分离制备新鲜PBMCs,用细胞原位杂交技术检测GD患者及对照组PBMCs内gp130mRNA的表达。应用计算机图像分析系统进行定量。
3.统计学分析所得数据以均数±标准差表示,用SPSS13.0统计分析,各组间比较采用方差分析。p<0.05为差别有统计学意义。
[结果]1.显微镜下定性观察:gp130mRNA原位杂交棕黄色阳性物质主要分布在细胞膜附近,胞浆着色较浅。GD初发期组病人外周血单个核细胞gp130mRNA杂交染色最深,可见浓染的团块棕黄色颗粒;维持期组、停药期组染色逐渐变浅,后者与正常对照组镜下观察大致相同。
2.原位杂交半定量分析显示:正常对照组外周血单个核细胞仅有少量的gp130mRNA表达(16.02±4.77),GD患者gp130mRNA表达量较对照组高,其中初发期组病人表达量最高(28.51±6.63),经治疗至维持期gp130mRNA表达量明显降低(22.25±2.92),但仍较正常对照组高(P=0.015);停药组病人gp130mRNA表达量(17.98±8.01)与正常对照组比较无统计学意义,明显低于初发组病人。
[结论]GD患者外周血单个核细胞内gp130mRNA表达被激活,初发期组表达程度最高,随甲亢治疗好转逐渐恢复至正常。
第三部分Graves病患者甲状腺组织IL-6及其受体的表达[目的]研究GD患者甲状腺组织内IL-6及其受体(gp80、gp130)的表达情况。
[材料与方法]1.对象及分组GD手术患者8例,对照组为8例甲状腺功能正常的结节性甲状腺肿或良性甲状腺瘤患者。
2.RT-PCR检测IL-6、gp80、gp130mPNA的表达含量GD组和对照组取术中切除甲状腺组织,提取RNA,RT-PCR检测IL-6,gp80、gp130,以B-actin为内参,计算相对表达强度。
3.免疫组化检测IL-6的表达甲状腺组织石蜡切片行IL-6免疫组织化学染色,采用全自动图像分析系统计算IL-6阳性单位表达值。
4.统计学分析所得数据以均数±标准差表示,用SPSS13.0统计分析,各组间比较采用t检验。p<0.05为差别有统计学意义。
[结果]1.甲状腺组织IL-6、gp80、gp130mRNA的表达8例GD患者中有6例甲状腺组织内有明显的IL-6mRNA表达,而对照组只有2例可见IL-6mRNA表达;GD组与对照组均检测出gp80mRNA的表达;除对照组中有1例外,其他样本均检测出gp130mRNA表达。GD组甲状腺组织内IL-6mRNA(0.1550±0.1137)、gp130mRNA(0.7556±0.1888)均较对照组的表达(0.0392±0.0741和0.5622±0.1211)升高,差异具有统计学意义。gp80mRNA在两组间的表达水平尚无显著性差异。
2.甲状腺组织IL-6免疫组化染色结果7例GD中甲状腺滤泡细胞胞浆内有片状、团块状IL-6表达,在浸润的淋巴细胞内也可见IL-6阳性表达。8例对照组甲状腺滤泡细胞内仅有4例有散在分布表达,且染色较浅,浸润淋巴细胞无阳性表达。定量分析示:GD组IL-6水平较对照组升高(22.69±3.12vs19.62±2.32),二者比较差别有统计学意义。(P=0.043)
[结论]GD患者甲状腺组织内IL-6及其受体(gp80、gp130)表达增强,参与了GD的发病过程。