目的本实验的目的是探讨低氧条件下,肝素结合表皮生长因子（heparin-binding epidermal growth factor like growth factor,HB-EGF）是否参与诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖,并明确其与细胞周期蛋白D1（cyclin D1,CCND1）的相互调控作用关系。方法取雄性SPF级的健康Sprague-Dawley大鼠,在体外分离大鼠的肺动脉,取平滑肌层进行原代培养,待传至3代开始形态鉴定及后续实验。实验的第一步是测出最优生长氧浓度:检测1%、2%、5%、10%、21%氧浓度条件下培养24小时、48小时、72小时的大鼠PASMCs增殖强度,以此来确定后续实验条件。在常氧及前面确定的氧浓度下培养大鼠PASMCs,用RT-PCR、Western-blot法检测两组中HB-EGF及CCND1表达情况。设计出大鼠HB-EGF siRNA、CCND1 siRNA序列,进行转染实验。实验分为:21%氧组、低氧组、低氧+NC siRNA组、低氧+HB-EGF siRNA组、低氧+CCND1 siRNA组。为了检测大鼠PASMCs在各条件下培养后的增殖活性,我们采用了MTT法;为了检测各组中HB-EGF及CCND1表达量我们采用了RT-PCR、Western-blot法。结果首先成功培养大鼠的原代PASMCs,采用α-SMA形态鉴定证实为PASMCs;再经24h、48h、72h培养检测发现,1%O2浓度条件下细胞增殖活性最强,故后续实验低氧浓度设为1%O2。采用MTT法检测发现1%氧组与1%氧+NC siRNA组中大鼠PASMCs的增殖活性最高,1%氧+HB-EGF siRNA组与1%氧+CCND1siRNA组大鼠PASMCs的增殖活性与低氧组相比明显受到抑制。检测低氧组的HB-EGF、CCND1的m RNA及蛋白的表达与常氧组相比具有明显升高;对置于1%氧条件下培养的PASMCs再做HB-EGF siRNA和CCND1 siRNA的转染,然后进行RT-PCR、Western-blot检测发现1%氧+HB-EGF siRNA组与余下4组相比HB-EGF的m RNA及蛋白的表达明显受到抑制,而在1%氧组、1%氧+NC siRNA及1%氧+CCND1 siRNA组中HB-EGF的m RNA及蛋白的表达相似。与1%氧组及1%氧+NC siRNA相比1%氧+HB-EGF siRNA组和1%氧+CCND1 siRNA组中CCND1的m RNA和蛋白的表达均明显受到抑制。结论本课题证明了低氧环境可以促进大鼠的PASMCs增殖,且探讨了HB-EGF与CCND1之间关系,证实低氧环境中HB-EGF可以促进CCND1的表达。