论文部分内容阅读
目的：研究紫杉醇提取物对大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)后海马神经元损伤的保护作用的分子机制。 方法：将雄性SD大鼠随机分组为：假手术对照组(sham)、缺血对照组(I/R)、溶剂处理组(DMSO)、紫杉醇组(缺血前30 min脑室注射紫杉，Pre-ischemia4μg/kg、8μg/kg、12μg/kg20μg/kg)。采用SD大鼠四动脉结扎脑缺血模型(4-VO)，缺血对照组大鼠以20％水合氯醛(300～350mg/kg)腹腔注射麻醉后，分离双侧颈总动脉并电凝椎动脉。于手术第二天给予15 min缺血并复灌不同时间(6 h，3 d，5 d)；假手术对照组处理和缺血对照组相同，但不结扎双侧颈总动脉。紫杉醇组缺血前(Pre-ischemia4μg/kg、8μg/kg、12μg/kg、20μg/kg)30 min脑室注射紫杉醇样品，用于焦油紫染色实验；于缺血前(Pre-ischemia8μg/kg)30 min脑室注射紫杉醇，用于MLK3/JNK3/Fas-L蛋白表达和激活测定，以相同体积的DMSO(1％)脑室注射作为溶剂对照。应用免疫沉淀及免疫印迹方法分析MLK3/JNK3/Fas-L的蛋白表达量和激活情况；焦油紫染色，观察紫杉醇对大鼠海马神经元的保护作用。 结果：焦油紫染色观察，缺血对照组及溶剂处理组海马CA1区出现明显神经元死亡，而紫杉醇组海马CA1区神经元无明显死亡迹象(P<0.05)。缺血15 min/再灌6 h，紫杉醇组p-MLK3出现明显抑制现象(P<0.05)，而溶剂处理组无明显变化，MLK3总蛋白的表达量未发现明显变化。缺血15 min/再灌3d，紫杉醇组p-JNK3出现明显抑制现象(P<0.05)，而溶剂处理组无明显变化，JNK3总蛋白的表达量未发现明显变化。缺血15 min/再灌6 h，紫杉醇组Fas-L表达量出现明显抑制现象(P<0.05)，而溶剂处理组无明显变化，Fas-L总蛋白的表达量未发现明显变化。 结论：紫杉醇对大鼠脑缺血/再灌注后诱导海马神经元的损伤具有保护作用，这种保护作用和JNK3介导的信号通路密切相关，为临床治疗脑中风提供理论依据。