绵羊与其他家畜相比,在胚胎体外生产过程中存在精子活力、卵母细胞利用率与胚胎成活率普遍偏低现象。而胞浆内单精子注射（Intracytoplasmic sperm injection,ICSI）技术能有效解决以上问题,能充分利用精子与卵母细胞,并有效提升胚胎成活率。但仍然有桑囊胚率偏低的难题,为优化绵羊ICSI胚胎的体外生产体系,提高桑囊胚率。本研究通过不同时间培养卵母细胞,确定最佳行ICSI时间;再确定胚胎培养液中发情绵羊血清（Estrus sheep serum,ESS）的最优浓度;最后比较常规精子与性控精子行ICSI操作后胚胎发育情况,在胚胎上利用牙釉质基因（AMEL）进行性别鉴定,以证明注射性控精子的可行性。研究主要包括以下3个方面:（1）试验一:为研究绵羊卵母细胞体外成熟培养不同时间对ICSI胚胎培养效果的影响,本试验将绵羊卵母细胞分别成熟培养22h、23h、24h、25h、26h后,立即脱颗粒细胞处理,随后进行ICSI操作,比较所得桑囊胚率。结果发现,在绵羊卵母细胞成熟培养24h,进行ICSI操作,所得桑囊胚率最高（33.71%）,显著优于成熟培养22h（25.92%）与26h（27.14%）（P＜0.05）,但与成熟培养23h（33.32%）、25h（32.38%）所得桑囊胚率差异不显著（P＞0.05）。说明绵羊卵母细胞在成熟培养24h时,能有效提升ICSI操作后的桑囊胚率。（2）实验二:为优化绵羊ICSI胚胎培养的培养效果,本试验在ICSI胚胎培养液中分别添加不同浓度（0%、5%、10%、15%、20%）ESS,比较ICSI操作后,用添加不同浓度ESS的ICSI胚胎培养液培养所得桑囊胚率。结果发现,绵羊卵母细胞进行ICSI操作后,在添加10%ESS的ICSI胚胎培养液中培养,所得桑囊胚率（38.45%）显著优于5%（34.08%）、15%（34.77%）与0%（30.94%）、20%（31.16%）（P＜0.05）。说明在绵羊ICSI胚胎培养液中添加10%的ESS,能有效提高桑囊胚率。（3）试验三:为研究绵羊ICSI操作时注射性控精子对ICSI胚胎培养效果的影响,本试验分别用常规精子、性控X精子、性控Y精子行ICSI操作,比较后期培养所得桑囊胚率,并对胚胎进行性别鉴定,从而来确定利用ICSI技术生产性控胚胎是可行的。结果发现,分别注射常规精子、X精子、Y精子所得桑囊胚率差异不显著（40.78%vs 38.54%vs 39.39%）（P＞0.05）,并用AMEL进行胚胎性别鉴定,发现胚胎性别与所注射性控精子特征相符,说明利用ICSI技术生产绵羊性控胚胎是可行的。综上所述,本研究确定了绵羊卵母细胞体外成熟的最佳时间及胚胎培养液中ESS的最优浓度,对绵羊ICSI胚胎体外生产体系进行了优化,并揭示了绵羊常规、X、Y精子行ICSI操作,性控胚胎桑囊胚率差异不显著（P＞0.05）。为绵羊体外胚胎生产体系及胞浆内单精子注射技术的发展提供进一步的技术支持,并为后期试验研究奠定一定基础。