HIF-1α通路介导MNNG诱发新生大鼠胃癌前病变的分子机制及益气活血方的干预作用

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目的 探究HIF-1α信号通路在MNNG诱发的PLGC大鼠胃黏膜中的表达及益气活血方对其的影响,探讨益气活血方干预PLGC的作用机制,为中医药治疗PLGC提供新方法。方法 健康成年SD大鼠自由交配后取出生3天乳鼠进行造模。正常组、模型组各取36只,模型组予800mg/L的MNNG0.1ml/只灌胃,正常组予0.1ml/只生理盐水,灌胃10天进行造模。第11天作为实验观察首日,第4、10、16、22、28、34周末每组各取6只处死并进行实验观察。第22周末随机抽取前期造模成功大鼠32只组成模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,各8只,正常组、模型组大鼠予生理盐水0.01ml/g,高、中、低剂量组每天分别予0.0384g/g、0.0192g/g、0.0096g/g的益气活血方流浸膏,饲养至34周时处死。观察HE染色后大鼠胃黏膜病理组织学变化;IHC法检测大鼠胃黏膜PCNA的表达及IOD值(Integral optical density,IOD);qRT-PCR法检测造模后及益气活血方干预后大鼠胃黏膜HIF-1α、VEGF、iNOS mRNA的表达;WB法检测造模后及益气活血方干预后HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白的表达,并应用统计学方法解释和分析数据及结果。结果 1.病理组织学:大体下观察,正常组大多数大鼠胃黏膜表面光滑润泽,色泽淡红,无明显充血水肿和糜烂,个别大鼠有充血水肿表现;模型组大鼠胃黏膜表面逐渐苍白灰暗,可见局部充血水肿及糜烂,皱襞变形紊乱,偶可见颗粒状结节。光镜下HE染色后可见模型组大鼠胃黏膜较正常组胞内炎性细胞增多,出现萎缩、肠化、异型增生。中药治疗组随剂量增加可见胃黏膜萎缩、肠化及异型增生均有不同程度的好转,其中中药高剂量组治疗效果最优。2.IHC结果:模型组大鼠胃黏膜PCNA阳性细胞表达高,着色深,分布紊乱,组间IOD有统计学差异(P<0.05),益气活血方治疗后高中低剂量组较模型组胃黏膜PCNA表达及IOD均有统计学差异P<0.05),其中高剂量组差异显著(P<0.01,P<0.05)。3.qRT-PCR结果:模型组大鼠胃黏膜HIF-1α信号通路关键基因HIF-1α、VEGF、iNOS mRNA表达较正常组增加,34周时差异显著(P<0.01,P<0.05)。益气活血方治疗后,大鼠胃黏膜HIF-1α、VEGF、iNOS mRNA的表达随剂量增加表达下降。HIF-1α、VEGF的mRNA的表达组间差异均有统计学意义(P<0.05),VEGFmRNA表达高剂量组与模型组间差异显著(P<0.01)。iNOS mRNA表达低剂量与模型组间差异无统计学意义(P>0.05)。4.WB结果:模型组大鼠胃黏膜HIF-1α信号通路关键基因HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白的表达16周后高于正常组,34周时差异显著(P<0.01,P<0.05)。VEGF蛋白的表达10周时组间差异有统计学意义(P<0.05),HIF-1α、iNOS蛋白表达16周时组间差异有统计学意义(P<0.05)。益气活血方治疗后,中高剂量组大鼠胃黏膜HIF-1α、VEGF及iNOS蛋白表达均较模型组在不同程度上有所降低(P<0.05),其中高剂量组HIF-1α、iNOS组间差异显著(P<0.01,P<0.05),低剂量组HIF-1α、VEGF的蛋白表达组间无统计学差异(P>0.05)。结论 1.随着PLGC的逐步进展,HIF-1α信号通路被激活,其表达随时间进展逐渐增加。2.益气活血方可以通过调控HIF-1α信号通路中关键基因的表达来抑制PLGC的进程。3.益气活血方高、中、低剂量均可达到抑制或延缓PLGC的目的,其中高剂量组效果最佳。
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