可调波长高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸和5-羟色胺

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目的:1.建立一种可变波长的高效液相色谱-荧光法(HPLC-FD)同时测定5-羟色胺(5-HT)和色氨酸(TRP),并用该方法测定健康成人血清中5-HT和TRP浓度。2.初步探讨测定血清中5-HT和TRP浓度在精神分裂症(Sch)中的临床意义。方法:1.色谱柱采用Hypersil C18柱(250mm×4.6mm i.d.,7μm,Thermo科学仪器有限公司);流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾/甲醇(85:15,V/V)溶液;流速为1.0mL/min;荧光检测激发波长和发射波长在0-6min分别为278nm和338nm,6-10min变换为280nm和340nm;血清标本与等量5%(V/V)高氯酸溶液混合处理去除蛋白后离心取上清液20μL直接进样分析。5-HT和TRP峰采用峰保留值和峰叠加法定性分析;用外标法测定峰面积进行定量分析;同时探讨了检测波长、流速、流动相中有机相的比例等因素对分离度和灵敏度的影响,并且考察了其它四种物质是否对待测组分的检测存在干扰。2.测定健康成人(n=71例)血清5-HT和TRP含量,并计算5-HT/TRP比值。3.测定Sch患者(n=70例)血清5-HT和TRP含量,并计算5-HT/TRP比值,初步探讨其含量变化在发病机制、病理生理、治疗监测等方面的临床意义。结果:1.5-HT保留时间约为4.9min,线性方程为Y=4223.5X-35448.2,最低检出浓度为1nmol/L,回收率为82.70%~95.40%,日内和日间RSD分别为2.03%和3.42%;TRP保留时间约为8.4min,线性方程为Y=421314X+38297.1,最低检出浓度为0.007μmol/L,回收率为83.67%~94.98%,日内和日间RSD分别为1.32%和3.31%;苯丙氨酸、酪氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸等物质对本方法无干扰。2.71例健康成人血清5-HT的浓度平均为(544.8±156.8)nmol/L;TRP浓度平均为(53.08±8.29)μmol/L,5-HT/TRP比值平均为(10.45±3.25)×10-33.70例Sch患者血清5-HT的浓度平均为(609.5±238.3)nmol/L,TRP浓度平均为(52.52±11.65)μmol/L,5-HT/TRP比值平均为(12.31±5.91)×10-3,与正常对照组比较,TRP浓度在各组差异无统计学意义;阳性型Sch患者5-HT浓度差异无统计学意义,阴性型Sch患者显著升高;5-HT/TRP比值升高。结论:1.本文建立了一种可变波长的HPLC-FD同时测定5-HT和TRP,并测定71例健康成人血清5-HT和TRP含量,方法简便、快速、灵敏,适于临床和科研应用。2.初步探讨血清5-HT、TRP和5-HT/TRP比值在Sch中的意义。与正常对照组比较,TRP浓度在各组差异无统计学意义;阳性型Sch患者5-HT浓度差异无统计学意义,阴性型Sch患者显著升高;5-HT/TRP比值升高。
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