【摘 要】
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目的:确定苦参碱具有调控肠道菌群抗PCV2的作用,并揭示其作用机制。方法:1.通过粪便移植技术,研究苦参碱调控肠道菌群发挥抗PCV2作用:将60只昆明小鼠随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组、PCV2感染组、苦参碱组、苦参碱粪便移植组、空白粪便移植组、利巴韦林阳性药物对照组;小鼠适应性饲养1周后,除空白对照组,其余各组均腹腔注射TCID50为10-5.4/0.1 m L的PCV2病毒0.5
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（32172904）； 山西省优秀青年科学基金（201801D211003）； 山西省重点研发计划项目；
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目的:确定苦参碱具有调控肠道菌群抗PCV2的作用,并揭示其作用机制。方法:1.通过粪便移植技术,研究苦参碱调控肠道菌群发挥抗PCV2作用:将60只昆明小鼠随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组、PCV2感染组、苦参碱组、苦参碱粪便移植组、空白粪便移植组、利巴韦林阳性药物对照组;小鼠适应性饲养1周后,除空白对照组,其余各组均腹腔注射TCID50为10-5.4/0.1 m L的PCV2病毒0.5 m L;感染5天后,苦参碱粪便移植组、空白粪便移植组通过灌肠方式分别给予200μL苦参碱粪便菌液、空白粪便菌液,苦参碱组、利巴韦林阳性药物对照组分别腹腔注射40 mg/kg的苦参碱、利巴韦林,每天处理1次,连续处理5天;给药后第6 d,采集小肠液（空肠与回肠交界处的小肠液）、肝脏、回肠,实时荧光定量PCR检测各组肝脏和回肠PCV2Cap基因表达量、回肠IL-1βm RNA及嗜酸乳杆菌相对表达量;ELISA检测各组小鼠小肠液中SIg A的含量。2.从昆明小鼠粪便中分离鉴定嗜酸乳杆菌,研究嗜酸乳杆菌的体内抗PCV2作用:将88只昆明小鼠随机分为11组,每组8只,分别为空白组对照组、PCV2感染组、利巴韦林阳性药物对照组、预防灌胃组、嗜酸乳杆菌治疗高、中、低剂量灌胃组、预防灌肠组、嗜酸乳杆菌治疗高、中、低剂量灌肠组;小鼠适应性饲养1周后,预防灌胃组、预防灌肠组分别灌胃、灌肠10~8CFU嗜酸乳杆菌;连续处理5天后（期间其余各组正常饲养）,除空白对照组,其余各组均腹腔注射TCID50为10-5.4/0.1 m L的PCV2病毒0.5 m L;感染5天后,嗜酸乳杆菌治疗高、中、低剂量灌胃组通过灌胃分别给予小鼠10~8、10~6、10~4CFU的嗜酸乳杆菌,嗜酸乳杆菌治疗高、中、低剂量灌肠组通过灌肠分别给予小鼠10~8、5×10~7、2.5×10~7CFU的嗜酸乳杆菌,利巴韦林阳性药物对照组腹腔注射40 mg/kg的利巴韦林,连续处理5天后（期间其余各组正常饲养）,采集各组肝脏、回肠,实时荧光定量PCR检测各组肝脏和回肠PCV2 Cap基因表达量、回肠IL-1βm RNA及嗜酸乳杆菌相对表达量。结果:1.粪便移植试验结果显示:与PCV2感染组相比,苦参碱、利巴韦林、空白粪便移植及苦参碱粪便移植均可以显著降低肝脏、回肠PCV2病毒载量及回肠IL-1βm RNA相对表达量（p＜0.05）;与空白对照组、PCV2感染组和空白粪便移植组相比,苦参碱及苦参碱粪便移植显著增高了回肠嗜酸乳杆菌的相对表达量（p＜0.05）,与空白对照组相比,PCV2感染组、利巴韦林阳性药物对照组回肠嗜酸乳杆菌相对表达量无显著差异（p＞0.05）;与PCV2感染组相比,苦参碱可以显著增加小肠液SIg A的含量（p＜0.05）,但苦参碱粪便移植、空白粪便移植和利巴韦林处理对小肠液SIg A的分泌无显著影响（p＞0.05）。结果表明,苦参碱可通过调控肠道菌群发挥抗PCV2、降低IL-1βm RNA相对表达量的药理作用,且这一药理作用的发挥可能与嗜酸乳杆菌有关。2.成功分离培养嗜酸乳杆菌,测序比对结果显示,待测菌株与嗜酸乳杆菌标准菌株CP 054559.1同源性为96.56%,分离培养菌株可用于后续嗜酸乳杆菌体内抗PCV2试验。3.嗜酸乳杆菌体内试验结果显示:与PCV2感染组相比,嗜酸乳杆菌灌胃、灌肠治疗组均可导致回肠嗜酸乳杆菌相对表达量的升高,并能显著降低肝脏、回肠PCV2病毒载量及回肠IL-1βm RNA相对表达量（p＜0.05）;与PCV2感染组相比,嗜酸乳杆菌预防灌胃、灌肠处理可以导致回肠嗜酸乳杆菌相对表达量的升高,并能显著降低回肠PCV2病毒载量及回肠IL-1βm RNA相对表达量（p＜0.05）,但是对肝脏PCV2病毒载量无显著影响（p＞0.05）。结果表明,嗜酸乳杆菌具有体内抗PCV2、降低IL-1βm RNA相对表达量的作用。结论:1.利用粪便移植技术,证实苦参碱可调控肠道菌群发挥抗PCV2的作用,并对PCV2诱导的炎症反应具有抑制作用。2.通过分离粪便中的嗜酸乳杆菌,证实嗜酸乳杆菌具有体内抗PCV2作用,并对PCV2诱导的炎症反应具有抑制作用。
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