【摘 要】
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目的:观察自发性膝骨关节炎（Osteoarthritis,OA）患者胫骨平台软骨细胞自噬功能下降对软骨细胞内糖原代谢及凋亡的影响。方法:根据国际骨关节炎协会（Osteoarthritis Research Society International,OARSI）人关节软骨组织学等级评定系统获取正常组（0～1级）、OA组（3～4级）两组软骨标本,制作组织学切片,其中Glycogenin-1的含量能够
【基金项目】
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山西省重点研发计划项目,（项目编号:201703D321027-4）,2017年7月至2021年12月；
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目的:观察自发性膝骨关节炎（Osteoarthritis,OA）患者胫骨平台软骨细胞自噬功能下降对软骨细胞内糖原代谢及凋亡的影响。方法:根据国际骨关节炎协会（Osteoarthritis Research Society International,OARSI）人关节软骨组织学等级评定系统获取正常组（0～1级）、OA组（3～4级）两组软骨标本,制作组织学切片,其中Glycogenin-1的含量能够反映细胞内糖原累积的水平,自噬相关的关键蛋白Beclin-1,可以反映软骨细胞自噬功能,通过检测细胞凋亡标志物Caspase–3蛋白来反映细胞的凋亡程度;将正常组（0～1级）、OA组（3～4级）两个组的软骨细胞,在体外进行传代培养至第三代然后进行实验研究,应用Tunel试剂盒检测并观察72小时两组软骨细胞的凋亡率,然后进行免疫组化检测Beclin-1蛋白,Glycogenin-1蛋白,Aggrecan蛋白,MMP-13蛋白和Caspase-3蛋白的表达情况。两组间数据比较使用成组t检验。结果:正常组与OA组进行番红O固绿染色,采用OARSI评分系统对软骨组织切片进行评价,可见正常组软骨组织浅表层完整,无损伤,染色较深;OA组软骨组织表面断裂,纵裂较深,浅层软骨细胞较正常组明显减少,软骨纵裂损伤区域染色较浅。体外细胞培养显微镜下观察可见:正常对照组软骨细胞呈类圆形,而OA组软骨细胞呈梭形,细胞突触较长,这是软骨细胞退变的表现。正常组与OA组进行细胞免疫组化染色,免疫组化评分进行评价,可以观察到:采用免疫组织化学方法分别检测了两组细胞的自噬和糖原积聚的生物标志物Beclin-1和Glycogenin-1的水平,可见OA组软骨细胞Beclin-1蛋白表达率低,而正常组细胞阳性表达率相对较高。骨性关节炎组织中Aggrecan蛋白水平降低,Glycogenin-1,MMP-13,Caspase-3蛋白水平升高;软骨细胞72h凋亡Tunel显示:OA组凋亡率高于正常组。结论:自发性骨关节炎发生时,软骨细胞的自噬水平下调,储存于软骨细胞内的糖原在消耗去路降低的情况下,在软骨细胞中积累,随后,软骨细胞因无法获得必要的葡萄糖,导致软骨细胞能量供应匮乏,从而加速了细胞凋亡,进而加速了OA的进展。
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