论文部分内容阅读
[目 的]子痫前期是一种严重威胁母胎健康的妊娠特异性性疾病,寻找可靠安全的药物具有重大的临床意义。子痫前期发病机制较为复杂,但一般认为是一种以炎症免疫过度激活为特征的妊娠期高血压疾病。维生素D不仅维持机体钙磷的浓度稳定,而且还具有抗炎、改善血管内皮等功能,维生素D缺乏与子痫前期有关。因此本研究通过建立与炎症免疫激活相关的妊娠早期子痫前期大鼠模型,在维生素D干预下,观察子痫前期模型大鼠表型和妊娠结局的改变,并探讨维生素D对子痫前期模型大鼠胎盘分子机制的保护作用及机制。[方 法]1.为了构建妊娠早期子痫前期大鼠模型,将妊娠大鼠随机分为2组,LPS子痫前期模型组(LPS组)和生理盐水对照组(Saline组)。在妊娠第五天(GD5),LPS组通过尾静脉注射LPS(0.5ug/kg),Saline组注射相同体积的生理盐水,观察其血压、尿蛋白和胎盘病理改变以及妊娠结局情况。2.将36只妊娠大鼠随机分为3组,包括生理盐水对照组(Saline),LPS子痫前期模型组(LPS组)和维生素D治疗组(LPS+VitaminD组)。在妊娠第五天(GD5),LPS 组和 LPS+VitaminD 组尾静脉注射 LPS(0.5ug/kg),Saline 组注射相同体积的生理盐水,同时LPS+VitaminD组从GD7到GD15给予维生素D治疗,观察三组大鼠表型特征和妊娠结局的改变以及子代空间学习和记忆情况。3.采用western bloting、免疫组化、ELISA和Tunel等技术检测维生素D干预后,LPS子痫前期模型大鼠胎盘维生素D代谢通路、炎症信号通路、氧化应激水平、血管内皮功能和细胞凋亡以及AKT,MAPK/ERK信号通路相关因子的表达。[结 果]1.Saline组和LPS组孕鼠在注射LPS之前血压分别为96.68±2.86mmHg和96.13±5.10mmHg,尿蛋白分别 2.02±0.73mg 和 2.23±0.42mg,差异均无统计学意义(P>0.05)。LPS组的血压在从GD6较对照组明显升高,差异有统计学意义(GD12:119.31±3.62mmHg VS 98.17±3.76mmHg,P<0.01)。LPS组的尿蛋白从GD9明显高于对照组,差异有统计学意义(GD18:3.99±0.85mg VS 1.92±0.29mg,P<0.01)。与 Saline 组相比,LPS 组孕鼠外周血血小板明显减少(976.1±59.8 VS 1042.5±63,P<0.05),而D-二聚体的水平比 Saline 组升高(0.17±0.02 VS 0.15±0.03,P<0.05)。LPS 组大鼠胎盘炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α的mRNA水平显著升高,HE染色显示胎盘和肾脏有不同程度病理改变。LPS组大鼠的胎盘和胎仔重量明显低于对照组。2.Saline组,LPS组和LPS+VitaminD组妊娠大鼠在GD3时的血压分别为96.69±2.87mmHg、96.12±5.09 mmHg 和 96.54+3.83 mmHg,14 小时尿蛋白分别为1.87±0.27mg、1.86±0.37mg和1.93±0.21mg,各组间收缩压和尿蛋白均无明显差异(P>0.05)。从GD6开始,LPS组血压高于Saline组(104.00±3.42 mmHg vs 97.19±2.90mmHg),从 GD9 开始,LPS 组蛋白明显要高于 Saline组(2.49±0.39mg vs 1.95±0.21mg),差异有统计学意义(P<0.05)。在 GD9 到GD18期间,补充维生素D的LPS处理大鼠血压和尿蛋白低于LPS组,平稳维持在与对照组相似的水平。补充维生素D后外周血和胎盘中促炎因子明显减少,并改善了子宫螺旋动脉的重塑,与对照组无差异(P>0.05),同时缓解了胎盘的病理变化。与LPS组相比,LPS+VitaminD组的胎仔和胎盘重量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。补充维生素D还改善了 LPS组脐带血管的损伤和子代空间学习和记忆能力,与Saline组无差异(P>0.05)。3.与Saline组相比,LPS子痫前期模型组胎盘VDR、CYP27B1的表达降低,而维生素D干预后显著上调VDR、CYP27B1的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。与Saline组和LPS+VitaminD相比,LPS组的氧化应激水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。同时补充维生素D还上调LPS组胎盘血管生长因子与血管舒张因子的表达,与Saline组无明显差异(P>0.05)。凋亡实验显示:LPS组胎盘促凋亡因子的活化上调,抑制凋亡因子表达下调,细胞凋亡数量增多,补充维生素D后可以下调凋亡因子的活化,抑制细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。三组妊娠大鼠的AKT,MAPK和ERK总的蛋白表达水平无明显差异(P>0.05),但LPS+VitaminD组胎盘AKT,MAPK/ERK信号通路磷酸化水平较LPS组显著提高,与Saline组无差异(P>0.05)。[结论]妊娠早期尾静脉注射LPS可以诱导妊娠大鼠出现高血压、蛋白尿和胎仔低出生体重等子痫前期表型。维生素D干预可以显著改善LPS诱导的子痫前期模型大鼠的表型特征和妊娠结局,并提高子代的空间学习和空间记忆能力。维生素D能促进胎盘VDR和CYP27B1的表达,提高维生素D在胎盘的生物学作用。维生素D可能通过抑制胎盘炎症信号通路相关因子的表达,下调LPS诱导的胎盘氧化应激的水平,改善胎盘血管内皮功能。维生素D还可能通过激活胎盘中AKT、MAPK/EKR相关信号通路,抑制LPS诱导引起的胎盘滋养细胞凋亡。