糖原合成酶激酶3(GSK3)是一种广泛存在于哺乳动物中的丝氨酸/苏氨酸类激酶，其作用的底物繁多，参与众多的信号通路并在其中发挥重要的功能。在哺乳动物中GSK3存在GSK3α和GSK3β两种亚型，已有研究表明GSKβ参与了细胞的增殖和分化过程的调控，本研究通过抑制GSK3β的活性，探究GSK3β对骨骼肌卫星细胞(SMSCs)增殖分化的作用。同时构建了MyHC2a启动子6个不同片段载体，利用双荧光素酶报告基因检测系统揭示GSK3β蛋白对MyHC2a启动子的转录调控作用，并为进一步研究GSK3β在肌肉生长发育中的作用提供理论基础。主要的结果如下:
　　1.SMSCs开始贴壁生长时，呈长梭形，分化的第1d，细胞有规律的朝同一方向生长，至第7d，细胞相互融合形成大量的肌管。qPCR检测结果显示在SMSCs的增殖期(0d)，Pax7和MyoD表达量高，而MyHC和MyoG几乎不表达;Pax7进入分化阶段后表达量极显著下降(P＜0.01);MyoD基因表达量在分化期维持较高水平(3d)，随后在分化5d和7d显著降低(P＜0.05);与增殖期相比，MyHC在分化3d、5d和7d时表达量显著上调(P＜0.01)，而在分化1d时表达量差异不显著;MyoG基因表达量与增殖期相比，在分化阶段表达量增加，其中在分化3d时达到最高(P＜0.01)，随后显著下调(P＜0.01)。
　　2.用SB216763抑制GSK3β蛋白的活性后，山羊骨骼肌卫星细胞的分化被抑制，同时分化标志基因的表达下调。与对照组相比，SB216763处理后增殖阶段的标志基因Pax7的表达量差异不显著，而MyoD基因表达量在0d显著降低(P＜0.05);而分化标志基因MyHC处理组在分化5d和7d时表达量极显著下调(P＜0.01)，而在0d、分化1d和分化3d的表达量无显著差异。MyoG基因表达量在增殖期无明显变化，进入分化阶段后表达量下降，在分化3d极显著下调（P＜0.01）。
　　3.利用双荧光素酶报告系统检测MyHC2a启动子片段的活性，结果表明:在SMSCs增殖阶段，构建的6个MyHC2a基因的启动子片段相对活性均显著地高于pGL3-basic的活性（P＜0.05）。片段154/+55的荧光素酶活性显著地低于片段-229/+55的相对荧光素酶活性(P＜0.05），说明片段-154到-229之间存在正向调控元件;片段-229/+55的相对荧光素酶活性显著地高于片段-466/+55(P＜0.05)，同时片段-466/+55，-514/+55，-704/+55和-1038/+55的荧光素酶活性无显著性差异，说明在片段-229/+55到片段-466/+55之间存在负向调控元件。在SMSCs分化阶段，通过片段缺失试验结果可以看出，片段-514/+55的荧光素酶活性最高，显著地高于片段-466/+55(P＜0.05)，说明-446到-514之间存在正向调控元件。而在片段-704/+55的荧光素酶活性显著地低于片段-514/+55的荧光素酶活性(P＜0.05)，而显著地高于片段-1038/+55的荧光素酶活性(P＜0.05)，说明-514到-704之间或-704到-1038间存在负向调控元件。
　　4.用双荧光素酶报告系统检测抑制GSK3β后MyHC2a启动子片段活性。结果表明:与单独转染构建的6个MyHC2a启动子活性相比，在SMSCs的增殖阶段，抑制GSK3β对山羊MyHC2a启动子片段-466/+55，-514/+55，-704/+55和-1038/+55的活性有显著促进作用(P＜0.05），而对片段-229/+55的活性有显著抑制作用(P＜0.05）;在SMSCs的分化阶段，抑制GSK3β对启动子片段-466/+55和-1038/+55的活性有显著促进作用(P＜0.05），而对片段-229/+55和-514/+55有显著抑制作用(P＜0.05）。