【摘 要】
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背景:青光眼在全球是仅次于白内障的导致视力丧失的主要病因,其最典型和最突出的表现是视网膜神经节细胞（Retinal ganglion cells,RGC）缺失和视野缺损。青光眼性视神经病变发生的因素复杂,近年来视网膜小胶质细胞的过度吞噬作用渐受关注。中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）中主要的吞噬细胞是小胶质细胞。正常状态下,小胶质细胞呈分支状,主要起到免疫监视和神
【基金项目】
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河南省科技发展计划项目（项目编号:182102410099）；
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背景:青光眼在全球是仅次于白内障的导致视力丧失的主要病因,其最典型和最突出的表现是视网膜神经节细胞（Retinal ganglion cells,RGC）缺失和视野缺损。青光眼性视神经病变发生的因素复杂,近年来视网膜小胶质细胞的过度吞噬作用渐受关注。中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）中主要的吞噬细胞是小胶质细胞。正常状态下,小胶质细胞呈分支状,主要起到免疫监视和神经营养功能,有助于大脑的发育;神经病理状态下,小胶质细胞发挥细胞免疫和吞噬作用,能异常吞噬应激状态下有活性的神经元,使神经元逐渐丧失。这种情况可以通过抑制小胶质细胞的异常吞噬来预防。环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate,c AMP）与小胶质细胞的活化和神经元的存活相关,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激可诱导激活小鼠BV2小胶质细胞,罂粟碱（papaverine,PAP）是一种磷酸二酯酶（Phosphodiesterase,PDE）抑制剂,能使细胞内的c AMP含量升高,进而激活小胶质细胞的信号通路,可抑制小胶质细胞的吞噬功能,然而罂粟碱对活化后视网膜小胶质细胞的吞噬功能的影响及机制尚在探索。目的:在细胞水平上,探讨罂粟碱抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞活化后的吞噬功能及其分子机制。方法:我们使用LPS诱导的BV2小胶质细胞活化模型。按PBS对照组、LPS组、不同浓度的PAP组及添加蛋白激酶A（Protein kinase A PKA）抑制剂H89组、添加EPAC抑制剂ESI-09组进行分组,采用荧光法检测及流式细胞法观察不同浓度罂粟碱作用下,BV2小胶质细胞吞噬微球情况。然后采用Western Blot定量分析PKA依赖性与非PKA依赖性通路活化水平,分析罂粟碱是否可以通过PKA依赖性通路（c AMP/PKA/CREB）和非PKA依赖性通路（c AMP/Epac/Rap1）抑制吞噬作用。结果:罂粟碱剂量依赖性的抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞的吞噬功能。未经特殊处理情况下,BV2小胶质细胞吞噬能力较低。LPS刺激BV2小胶质细胞后,BV2小胶质细胞对荧光胶珠的吞噬有明显的增强（p＜0.0001）,但罂粟碱能够显著的、剂量依赖性的抑制但并不能完全阻断上述吞噬功能（与LPS比,2μg/ml罂粟碱:p＜0.001,10μg/ml罂粟碱:p＜0.0001）。罂粟碱提高BV2小胶质细胞CREB的磷酸化水平,H89能够部分抑制CREB的磷酸化。LPS处理情况下,BV2小胶质细胞CREB的磷酸化水平较低。10μg/ml的罂粟碱处理后使CREB的磷酸化水平显著上调（p＜0.01）,H89能够部分抑制CREB的磷酸化水平（与LPS+PAP组相比:p＜0.001）。罂粟碱提高BV2小胶质细胞Rap1的磷酸化水平,ESI-09不能够抑制Rap1的磷酸化。10μg/ml的罂粟碱处理后使Rap1的磷酸化水平显著上调（p＜0.05）,ESI-09不能够抑制Rap1的磷酸化水平（与LPS+PAP组相比:p＞0.05）。结论:罂粟碱剂量依赖性的抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞的吞噬能力,罂粟碱可通过活化PKA依赖性通路（c AMP/PKA/CREB）抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞的过度吞噬。
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