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目的:探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cells, hBMSCs)定向诱导分化为心肌样细胞的实验条件。方法:取成人弃骨骨髓,通过全骨髓贴壁法分离培养hBMSCs。在传至第三代时,筛选具有心肌特异性分化潜能的c-kit~+的hBMSCs细胞克隆,用含20%胎牛血清的低糖DMEM培养液继续克隆培养。当细胞达到70%融合时,分别用10μmol/l5-氮胞苷(5-azacytidine crystalline,5-aza),100mg/l参麦注射液,10μmol/l5-氮胞苷和100mg/l参麦注射液3组诱导剂诱导hBMSCs。24小时后,更换为含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液继续培养。在诱导3周后,通过显微镜下观察其形态变化。用免疫细胞化学方法检测心肌特异性标记抗原Desmin和肌钙蛋白T的表达;用RT-PCR方法检测心肌特异基因心房利尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)表达。结果:骨髓中含有多种hBMSCs细胞克隆,其中成纤维细胞样克隆表达c-kit~+。分别用3组诱导剂诱导c-kit~+细胞15天后,部分细胞胞体明显增粗,可见有些细胞间有融合样现象发生。诱导3周后,3组都有类似肌管样细胞出现,细胞短粗,呈不规则的圆柱形,有分支,互相连成网。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin HE)染色后,3组细胞都排列规则,类似于心肌细胞的形态,可见部分细胞有排列规则的横纹样结构。免疫细胞化学显示诱导3周后的hBMSCs,Desmin阳性细胞数目分别是:5-aza组(65.3±4.7%),参麦注射液组(62.3±3.9%),5-aza和参麦注射液组(68.5±2.1%),3组Desmin阳性细胞表达率无显著差异; cTnT阳性细胞数目分别是:5-aza组(62.2±4.1%),参麦注射液组(63.8±3.4%), 5-aza和参麦注射液组(66.0±6.2%),3组Desmin阳性细胞表达率无显著差异。阴性对照组和未分化的hBMSCs均无Desmin和cTnT的表达。RT-PCR显示3种不同的诱导剂诱导hBMSCs3周后都有ANP,BNP的表达,未分化的hBMSCs无ANP,BNP的表达。结论:5-aza和中药可以诱导c-kit~+的hBMSCs细胞克隆分化为心肌样细胞。体外诱导成的心肌样细胞表现为未成熟心肌细胞的结构和功能特征。证明骨髓中含有多种干细胞克隆,c-kit可作为筛选hBMSCs向心肌样细胞分化的一项检测指标。筛选具有心肌特异性分化潜能的hMSCs可提高诱导分化率。