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目的:
尿道狭窄为泌尿外科常见且容易复发的疾病,基本病理改变为炎性物质渗出、尿道内壁瘢痕组织过度增生及挛缩,引起尿道梗阻或部分梗阻。瘢痕组织为创伤愈合的产物,而瘢痕组织的过度增生导致尿道狭窄,现代研究表明成纤维细胞是尿道创伤愈合过程中的主要细胞,其强大的增殖能力及分泌的胶原为尿道狭窄形成的关键。传统中药丹参具有抗炎、改善微循环以及抑制间质细胞活化等药理功效,并通过多成分与多环节的作用来抗脏器的纤维化。本课题旨在通过对丹参含药血清干预后人尿道狭窄成纤维细胞增殖变化的研究,以明确丹参是否可抑制人尿道狭窄成纤维细胞的增殖,从而为丹参在临床上的进一步推广及新药的研发提供相关理论依据,力求从中医药在预防及治疗尿道狭窄上探寻新的思路及方法。
方法:
1.提取人尿道狭窄组织的黏膜下组织,经组织块法培养获得原代人尿道狭窄成纤维细胞,并采用HE染色及波形蛋白单克降抗体染色鉴定细胞,再取4-6代细胞冻存用于后续细胞实验。2.取清洁级SD大鼠,雌雄各半,共32只,随机分为4组:①正常组;②丹参低剂量组;③丹参中剂量组;④丹参高剂量组,每组8只。适应性喂养1W后,丹参水煎液按高、中、低剂量组分别灌胃2.70g/kg、1.35g/kg、0.68g/kg,各组每日灌胃给药1次(2ml/次),正常组则给予相同量的生理盐水,连续灌胃7d后,所有大鼠经腹主动脉采血。将获得的血液离心后,吸取上层血清并置于-80℃冰箱冷藏备用。3.采用MTT法检测丹参含药血清对尿道狭窄成纤维细胞增殖的影响;免疫组化检测丹参含药血清作用于尿道狭窄成纤维细胞后,对增殖细胞核抗原表达的影响;流式细胞仪检测丹参含药血清对尿道狭窄成纤维细胞周期的影响。
结果:
1.尿道狭窄成纤维细胞体外培养6-8W后可传第一代,后每5-10d可传一代,传代及冰冻复苏后细胞生长良好,HE染色及波形蛋白免疫组化染色鉴定为成纤维细胞。2.MTT法检测显示随着丹参剂量增加和时间延长,尿道狭窄成纤维细胞的吸光度(OD值)逐步降低(p<0.05)。3.尿道狭窄成纤维细胞增殖细胞核抗原免疫组织化学染色的阳性率随丹参剂量增加而降低(p<0.05)。4.流式细胞仪检测可见丹参剂量越高,尿道狭窄成纤维细胞被阻断于G1期的细胞数量越多(p<0.05)。
结论:
丹参可抑制尿道狭窄成纤维细胞的增殖,且抑制效果随丹参剂量及作用时间的增加而增强,提示丹参在预防和治疗尿道狭窄中的作用值得进一步研究。
尿道狭窄为泌尿外科常见且容易复发的疾病,基本病理改变为炎性物质渗出、尿道内壁瘢痕组织过度增生及挛缩,引起尿道梗阻或部分梗阻。瘢痕组织为创伤愈合的产物,而瘢痕组织的过度增生导致尿道狭窄,现代研究表明成纤维细胞是尿道创伤愈合过程中的主要细胞,其强大的增殖能力及分泌的胶原为尿道狭窄形成的关键。传统中药丹参具有抗炎、改善微循环以及抑制间质细胞活化等药理功效,并通过多成分与多环节的作用来抗脏器的纤维化。本课题旨在通过对丹参含药血清干预后人尿道狭窄成纤维细胞增殖变化的研究,以明确丹参是否可抑制人尿道狭窄成纤维细胞的增殖,从而为丹参在临床上的进一步推广及新药的研发提供相关理论依据,力求从中医药在预防及治疗尿道狭窄上探寻新的思路及方法。
方法:
1.提取人尿道狭窄组织的黏膜下组织,经组织块法培养获得原代人尿道狭窄成纤维细胞,并采用HE染色及波形蛋白单克降抗体染色鉴定细胞,再取4-6代细胞冻存用于后续细胞实验。2.取清洁级SD大鼠,雌雄各半,共32只,随机分为4组:①正常组;②丹参低剂量组;③丹参中剂量组;④丹参高剂量组,每组8只。适应性喂养1W后,丹参水煎液按高、中、低剂量组分别灌胃2.70g/kg、1.35g/kg、0.68g/kg,各组每日灌胃给药1次(2ml/次),正常组则给予相同量的生理盐水,连续灌胃7d后,所有大鼠经腹主动脉采血。将获得的血液离心后,吸取上层血清并置于-80℃冰箱冷藏备用。3.采用MTT法检测丹参含药血清对尿道狭窄成纤维细胞增殖的影响;免疫组化检测丹参含药血清作用于尿道狭窄成纤维细胞后,对增殖细胞核抗原表达的影响;流式细胞仪检测丹参含药血清对尿道狭窄成纤维细胞周期的影响。
结果:
1.尿道狭窄成纤维细胞体外培养6-8W后可传第一代,后每5-10d可传一代,传代及冰冻复苏后细胞生长良好,HE染色及波形蛋白免疫组化染色鉴定为成纤维细胞。2.MTT法检测显示随着丹参剂量增加和时间延长,尿道狭窄成纤维细胞的吸光度(OD值)逐步降低(p<0.05)。3.尿道狭窄成纤维细胞增殖细胞核抗原免疫组织化学染色的阳性率随丹参剂量增加而降低(p<0.05)。4.流式细胞仪检测可见丹参剂量越高,尿道狭窄成纤维细胞被阻断于G1期的细胞数量越多(p<0.05)。
结论:
丹参可抑制尿道狭窄成纤维细胞的增殖,且抑制效果随丹参剂量及作用时间的增加而增强,提示丹参在预防和治疗尿道狭窄中的作用值得进一步研究。