背景:腺病毒是一种引起广泛疾病谱的病原体,能导致急性呼吸道疾病、流行性角膜结膜炎、肠胃道疾病、肺炎等。迄今为止,腺病毒分为7大种类(A-G),共计103种型别,其中HAdV-3、HAdV-4、HAdV-7经常引起呼吸道感染疫情的爆发,HAdV-55导致社区获得性肺炎甚至死亡。传统的血清学鉴定方法和分子分型方法是主要的两种鉴定方式,鉴于血清学鉴定方法耗时长,价格昂贵和容易产生假阳性等缺点,分子分型成为现在的主流腺病毒鉴定方法。由于腺病毒具有重组现象,本课题对武汉地区分离的呼吸道腺病毒的Penton、Hexon和Fiber基因进行分型和分子进化研究,为腺病毒预防提供新的检测手段。目的:研究呼吸道腺病毒在婴幼儿中的分布情况,鉴定腺病毒在我国中部地区的主要流行型别以及分析腺病毒的分子进化情况,为腺病毒预防和疫苗研究提供理论指导。针对腺病毒基因组重组现象,本论文建立了 Penton、Hexon和Fiber基因片段分型的腺病毒鉴定方法。方法:(1)本研究利用采集的儿童咽拭子样本在A549细胞上进行腺病毒的分离;(2)利用实时荧光定量PCR鉴定腺病毒分离情况;(3)腺病毒Penton、Hexon、Fiber基因PCR扩增和测序,进行腺病毒的分型;(4)利用多序列比对分析及系统进化树的构建,对Penton、Hexon和Fiber进行分子进化研究。结果:(1)本研究成功获得48株腺病毒毒株,涵盖HAdV-B、HAdV-C和HAdV-E人类腺病毒三大种类。HAdV-3(47.9%)和HAdV-7(43.7%)是两个主要类型,HAdV-4(4.2%)、HAdV-55(2.1%)和 HAdV-6(2.1%)次之;(2)根据HAdV-3分离株的Penton、Hexon和Fiber基因序列同源性分析,此次分离的HAdV-3毒株属于基因型HAdV-3a51;同理,HAdV-7分离株属于基因型HAdV-7d;HAdV-4分离株属于基因型HAdV-4a1。结论:武汉地区儿童感染呼吸道腺病毒主要以HAdV-3和HAdV-7为主,并且小于5岁儿童具有较高的感染呼吸道腺病毒的风险。