【摘 要】
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目的:研究孕前心理应激对小鼠子代生长发育、神经内分泌和各级卵泡发育的影响,并基于KITL-FOXO3通路,探讨开郁种玉汤抑制孕前心理应激导致的小鼠子代始基卵泡过度激活的作用机制。方法:1、慢性心理应激模型制备将60只SPF级4-5周龄健康未孕雌性ICR小鼠随机分为3组,A:对照（Control）组;B:心理应激（Stress）组:建立慢性不可预见性心理应激模型;C:心理应激+开郁种玉汤（Stres
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目的:研究孕前心理应激对小鼠子代生长发育、神经内分泌和各级卵泡发育的影响,并基于KITL-FOXO3通路,探讨开郁种玉汤抑制孕前心理应激导致的小鼠子代始基卵泡过度激活的作用机制。方法:1、慢性心理应激模型制备将60只SPF级4-5周龄健康未孕雌性ICR小鼠随机分为3组,A:对照（Control）组;B:心理应激（Stress）组:建立慢性不可预见性心理应激模型;C:心理应激+开郁种玉汤（Stress+KYZY）组:建立慢性不可预见性心理应激模型后,给予开郁种玉汤灌胃4周。每组20只,通过小鼠体重、旷场实验、糖水偏好实验、ELISA法检测小鼠血清中CRH、ACTH、CORT水平来进行模型验证。2、开郁种玉汤对孕前心理应激小鼠子代生长发育和神经内分泌的影响造模成功后,各组小鼠按雌:雄=2:1的比例,与ICR雄性小鼠合笼,确认其受孕后分笼饲养直至分娩,分娩第一天记为小鼠子代出生第一天。记录每组子代个体数量及16天时的体重;ELISA法检测各组子代下丘脑Gn RH、CRH含量。3、开郁种玉汤对孕前心理应激小鼠子代始基卵泡激活的影响对各组小鼠子代卵巢组织进行HE染色,光镜下观察各组子代卵泡发育形态并计数各级卵泡数量;q PCR法检测各组子代卵巢组织中与始基卵泡发育相关的卵母细胞特异性因子Nobox、Figla、Lhx8、Sohlh1的m RNA表达量。4、开郁种玉汤调节孕前心理应激小鼠子代始基卵泡过度激活的作用机制免疫组化法检测各组小鼠子代卵巢中始基卵泡颗粒细胞PCNA、KITL的表达以及卵母细胞中FOXO3的核移位情况。结果:1.各组小鼠慢性不可预见性心理应激模型的验证与对照组比较,心理应激组和心理应激+开郁种玉汤组小鼠体重增长缓慢（P＜0.01）,造模结束后体重显著降低（P＜0.01）,糖水消耗量减少,糖水偏好系数明显降低（P＜0.01）,旷场实验相关指标:运动距离、运动时间和进入中央区域次数减少、静止时间延长（P＜0.01）,血清CRH、ACTH、CORT含量显著升高（P＜0.01）,证明慢性不可预见性心理应激模型制备成功。2.各组小鼠子代个数、体重及下丘脑CRH、Gn RH含量的比较与对照组比较,心理应激组小鼠子代总数显著减少（P＜0.01）,其中雄性子代个数显著减少（P＜0.01）,子代体重显著降低（P＜0.01）,下丘脑CRH含量明显升高（P＜0.01）;心理应激+开郁种玉汤组小鼠子代总数及雄性个体数量均显著增加（P＜0.05）,子代体重显著增加（P＜0.01）,下丘脑CRH含量显著降低（P＜0.01）。各组子代下丘脑Gn RH含量无统计学差异（P＞0.05）。3.各组小鼠子代各级卵泡计数及Nobox、Figla、Lhx8、Sohlh1 m RNA含量的比较与对照组比较,心理应激组小鼠子代卵巢中始基卵泡数量显著减少（P＜0.01）,初级卵泡和窦卵泡数量显著增加（P＜0.01）;心理应激+开郁种玉汤组小鼠子代始基卵泡数量显著增加（P＜0.01）,初级卵泡和窦卵泡数量显著减少（P＜0.01）。各组小鼠子代次级卵泡数量无统计学差异（P＞0.05）。与对照组比较,心理应激组小鼠子代Figla、Lhx8 m RNA的表达量显著降低（P＜0.05）,Nobox、Sohlh1 m RNA的表达量无显著差异（P＞0.05）;心理应激+开郁种玉汤组小鼠子代Figla、Lhx8、Sohlh1 m RNA的表达量较应激组显著增加（P＜0.05,P＜0.01）,其中Lhx8 m RNA的表达量显著高于对照组（P＜0.05）。4.各组小鼠子代始基卵泡颗粒细胞PCNA、KITL蛋白表达及始基卵泡卵母细胞FOXO3核移位的比较与对照组比较,心理应激组小鼠子代PCNA阳性细胞率显著增加（68.88%vs36.91%,P＜0.01）,KITL蛋白表达显著增加（P＜0.05）;心理应激+开郁种玉汤组小鼠子代PCNA阳性细胞率（31.66%vs 68.88%,P＜0.01）显著降低,KITL蛋白的表达显著降低（P＜0.05）。与对照组比较,心理应激组小鼠子代FOXO3核移位率显著增加（P＜0.01）;心理应激+开郁种玉汤组小鼠子代FOXO3核移位率显著降低（P＜0.01）。结论:1.孕前心理应激导致小鼠子代生长发育受限、神经内分泌功能紊乱;2.孕前心理应激诱导小鼠子代始基卵泡过度激活,导致子代卵巢储备功能下降;3开郁种玉汤通过下调KITL-FOXO3通路,抑制小鼠子代始基卵泡过度激活,保护雌性后代生育力。
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