研究背景近年,随着对女性肿瘤研究不断探索,宫颈癌已经成为继乳腺癌、卵巢癌后对女性健康威胁较大的最常见的恶性肿瘤之一。宫颈癌好发部位常见于宫颈鳞状上皮及柱状上皮的交界处,而该部位又是人乳头瘤病毒(HPV)易侵袭及感染部位,HPV长时间感染将是导致宫颈病变原因之一,近些年通过相关研究发现随着宫颈癌筛查的普及和宫颈癌与癌前病变的早期发现,宫颈癌的发病率和死亡率明显下降,但研究发现宫颈癌有向低龄化发展的趋势。目前对宫颈癌的治疗主要还是以外科手术为主、放疗、化疗为辅的综合治疗的传统的治疗方法。无论是通过手术切除病灶,还是部分患者及全身不适宜手术者只能通过放疗、化疗来进行治疗,但都会对患者的身体、精神、心理、家庭及社会带来一些重创。为了减轻宫颈癌患者治疗时手术痛苦以及一些放化疗的副作用,我们医疗工作者和研究人员一直不断探求新的治疗方法,希望通过科学的研究探索新的治疗手段,能够更好的治疗患者以及提高病人的生活质量。肌母细胞移植治疗对于一些疾病的治疗目前是国际上较为先进的一种新型治疗技术,且肌母细胞取材容易、体外培养条件下增殖能力高并能维持未分化状态、致癌率低等特点。研究人员通过大量实验发现证实肌母细胞移植治疗对多种疾病有较好的疗效,如杜氏肌营养不良、缺血性心肌病、前列腺癌、Ⅱ型糖尿病、尿失禁等。研究目的本论文主要研究肌母细胞治疗宫颈癌的效果及对相关机制探索。研究通过建立人裸鼠模型、分组并采取不同治疗方法、组织的HE染色、免疫组化、Western Blot等方法对生理盐水组、顺氯氨铂组、肌母细胞组进行比较研究,实验结果将作为评判不同实验方法对宫颈癌治疗效果的依据。通过本次实验结果,探索肌母细胞能否成为治疗宫颈癌的新方法,并比较不同组别间裸鼠精神、体重、瘤体变化及探讨肌母细胞移植技术治疗宫颈癌的机制,为患者带来更多希望。材料与方法用购买于北京维通利华有限公司的30只裸鼠注射细胞构建动物模型,建模结束后,随机将30只裸鼠平均分为3组,每组10只,每组分别腹腔注射生理盐水(0.2ml/只),顺氯氨铂(腹腔注射)及肌母细胞(瘤体注射0.2ml,1.0x107个)。每组裸鼠进行处理后每隔1天测量瘤体体积大小并观察裸鼠的生长情况,观察5周后,腹腔注射氯仿(800mg/kg)麻醉成功后将瘤体从体内取出。实验利用HE染色、免疫组化、Western Blot方法对肿瘤细胞的相关变化以及肿瘤组织中相关蛋白的变化进一步检测。研究结果实验建模成功及分组后,我们分别对生理盐水组、顺氯氨铂组和肌母细胞组裸鼠的体重和肿瘤大小进行测量,给药前三组裸鼠体重分别为(16.13 ± 016)g、(16.08±021)g 和(16.09±0.19)g,体积为:(109.98±3.92)mm3、:(111.84±4.72)mm3、(112.90±4.53)mm3。给予相应处理后,用相同的方法监测3组裸鼠的体重和肿瘤体积,各组裸鼠体重分别为(16.61 ±0.26)g、(16.05±0.22)g和(15.75±0.22)g,肿瘤体积分别为:(165.36±5.04)mm3、(133.42±5.62)mm3(89.45±4.87)mm3。HE染色:实验结果显示,生理盐水组,细胞形态表现与一般恶性肿瘤表现无明显差异。图中我们可以观察到明显的细胞株、细胞间桥、明显的异型性细胞、肿瘤细胞体积大、细胞核增多以及肿瘤细胞间的小部分碎裂、崩解、坏死的细胞,这是由于肿瘤细胞增长过快、营养供给不足而出现的组织间隙局灶性坏死灶;顺氯氨铂组组织切片中可以观察到较明显的肿瘤细胞固缩、细胞核裂解及固缩,可见其坏死灶较生理盐水组有明显的增大趋势;肌母细胞组内可见大量明显凋亡、坏死肿瘤细胞,大量明显的细胞固缩、核碎裂,组织的纤维化均较上面两组扩大。免疫组化结果生理盐水、顺氯氨铂、肌母细胞组中阳Ki67性率分别为80.0%、40.0%、20.0%;Her-2染色结果:生理盐水、顺氯氨铂、肌母细胞组阳性率分别为50.0%、40.0%、10.0%。Western Blot实验提示:三组中Ki67蛋白含量分别为 1.187±0.044、0.764±0.145,0.420±0.108,统计学显示,P值均<0.05;三组Her-2蛋白量分别为0.694±0.043、0.534±0.056,0.460±0.093,统计学分析提示肌母细胞与生理盐水组蛋白含量有差异(P<0.05),其余各组均无差异(P值均>0.05)。结论本实验通过分别给予不同的治疗方法可以得到如下实验结果:1、三组实验经过对比可以看出肌母细胞治疗组裸鼠体重增长较快、瘤体缩小较明显,三组数据在统计学上有明显的意义。2、HE染色结果显示,肌母细胞组较其他两组组织内见大量细胞崩解、坏死。3、免疫组化和Western Blot均提示肌母细胞组组织内Ki67蛋白含量明显减少,Her-2免疫组化未显示出明显的差异,但Western Blot提示肌母细胞组蛋白含量较生理盐水组明显降低,从以上几个方面我们可以初步看出肌母细胞对治疗宫颈癌有较好的治疗作用。