【摘 要】
：
肝母细胞瘤（Hepatoblastoma,HB）作为儿童常见肝脏肿瘤,其每年的发病率是以1.2-1.5/百万人口/年递增的。治疗肝母细胞瘤的重要手段为肝脏肿瘤切除术,肝母细胞瘤切除是否干净成为影响预后的重要因素。单纯手术治疗容易复发,自20世纪80年代加入化疗以来,特别对于无法一期手术患儿,术前进行辅助化疗,总存活率已从30%显著提高。但有远处转移或复发病例的患儿病死率仍较高。肿瘤的复发及转移是目
论文部分内容阅读
肝母细胞瘤（Hepatoblastoma,HB）作为儿童常见肝脏肿瘤,其每年的发病率是以1.2-1.5/百万人口/年递增的。治疗肝母细胞瘤的重要手段为肝脏肿瘤切除术,肝母细胞瘤切除是否干净成为影响预后的重要因素。单纯手术治疗容易复发,自20世纪80年代加入化疗以来,特别对于无法一期手术患儿,术前进行辅助化疗,总存活率已从30%显著提高。但有远处转移或复发病例的患儿病死率仍较高。肿瘤的复发及转移是目前肝母细胞瘤死亡的主要原因,也是影响肝母细胞瘤患儿长期生存率的重要因素。Krüppel样因子5（KLF5,又称碱性转录元件结合蛋白2,BTEB2和肠道富集型KRüppel样因子）属于Krüppel样转录因子家族,在多种组织中广泛表达。在癌细胞内,KLF5对细胞存活、细胞周期、凋亡和迁移有重要影响。有实验研究表明,KLF5在胰腺癌、胃癌、乳腺癌、大肠癌、肝癌中均有促进肿瘤增殖作用。目前还没有KLF5基因在肝母细胞瘤中作用研究的相关报道。本研究拟通过干扰KLF5在HB肿瘤细胞中的表达,通过体外和体内实验,探索KLF5在HB肿瘤细胞增殖、凋亡等细胞生物学行为中的作用,为肝母细胞瘤的治疗发现新的靶点。目的:通过RNA干扰技术,构建KLF5基因sh RNA慢病毒载体,转染肝母细胞瘤Huh6及Hep G2细胞,获得KLF5基因稳定沉默的Huh6及Hep G2细胞系,探讨KLF5对Huh6及Hep G2细胞增殖、凋亡及裸鼠体内成瘤能力等的影响及机制。方法:1、体外培养人肝母细胞瘤Huh6细胞及Hep G2细胞,设计KLF5基因的特异性sh RNA靶点,构建3条不同的sh RNA慢病毒载体并感染Huh6及Hep G2细胞,采用Real-time PCR方法检测Huh6细胞中KLF5的m RNA水平变化,Western Blot方法用以检测KLF5蛋白水平的表达,选择2条干扰效果较好的sh RNA基因,作为后期研究和病毒包装实验基因,构建基因稳定沉默的细胞系。用不含KLF5 sh RNA的质粒慢病毒感染细胞作为阴性对照。2、采用克隆形成实验、CCK8增殖试验、流式细胞术、Western-Blot及PCR等实验方法检测KLF5基因沉默后Huh6及Hep G2细胞的增殖、凋亡、下游分子等生物学行为的变化及机制。3、将KLF5基因沉默后Huh6细胞移植到裸鼠皮下,培养6周后取肿瘤组织,测肿瘤直径,对肿瘤组织行KLF5、Ki67免疫组化染色,并与NC组进行对比。4、收集KLF5实验组及NC组Huh6细胞及Hep G2细胞RNA,送检RNA-Seq,进行下游相关分析。结果:1、成功构建3条sh RNA-KLF5慢病毒载体,选择2条干扰效果佳的sh RNA,感染Huh6及Hep G2细胞,建立KLF5稳定表达的细胞系。2、克隆形成实验结果显示,KLF5基因沉默组克隆形成率与对照组相比明显降低（p＜0.05）;CCK8的增殖实验结果提示当基因KLF5沉默后相关细胞增殖能力明显降低（p＜0.05）;流式细胞术分析肿瘤细胞凋亡率变化,结果提示基因沉默组肿瘤细胞的凋亡率明显增高（p＜0.05）。3、裸鼠体内成瘤实验显示,KLF5基因沉默组肿瘤直径均明显小于对照组（p＜0.05）。干扰组肿瘤KLF5及Ki67的表达阳性率显著低于对照组（p＜0.001）。4、Western-Blot实验显示,与NC组相比,Huh6细胞实验组中,PARP条带可见明显分割,ELF3表达量可见下调,HNF1A、HNF4A、Cyclin D1无明显变化;Hep G2细胞实验中,MAFF表达量可见明显下调。结果提示肝母细胞瘤细胞的凋亡途径可能与PARP有关,MAFF及ELF3可能是KLF5的下游基因。结论:1、成功构建3条sh RNA-KLF5慢病毒载体,筛选出2条沉默效率好的KLF5干扰基因sh1及sh3,构建KLF5稳定沉默的肝母细胞瘤Huh6及Hep G2细胞系。2、KLF5可能通过影响肝母细胞瘤细胞的增殖、凋亡而促进肝母细胞瘤的增殖。3、KLF5可能通过PARP凋亡途径调控肝母细胞瘤的增殖。4、MAFF及ELF3可能是KLF5的下游基因。
其他文献
范畴研究一直是古文论研究的重点。近年来随着研究深度、密度不断推进,曾经鲜被关涉的颇具负向属性的另类美学范畴开始被发掘、开显。兼之从上世纪八十年代始,学者们逐渐在跨学科视阈下宏观研讨古代文论的范畴和言说质性,更为古文论研究开辟了新的路径与方法。如从思维发生角度考察古人在铨文论艺时标举、运用负类美学范畴的深层原因,正是这一研究理路的践行。从标举现象上看,“负类范畴”是“枯”“逆”“生”“硬”“拗”“涩
现阶段我国已取得脱贫攻坚战的全面胜利。旅游扶贫已然成为民族地区脱贫与乡村振兴的重要抓手,当地居民通过发展旅游小企业参与到乡村旅游中获取经济收益。但乡村旅游地相对贫困仍然存在,返贫现象仍有可能出现。发展旅游小企业作为旅游扶贫的重要方式,面临着多重挑战。旅游小企业嬗变过程与影响因素研究为本地旅游小企业可持续成长提供理论借鉴,推动旅游地社会经济发展。文章运用质性研究方法,探析呼伦贝尔市室韦苏木“俄罗斯家
明末清初属于杂剧的转型期,其中自喻性是转型特点之一。自喻性即作者在作品中通过与自己经历或情感体验相似的主人公,抒发作者情志的手法。杂剧本身是面向大众的具有社会性的表演艺术,当其社会性逐渐转为描写个人私密性情感时,它的内容、艺术手法也随之发生改变。明末清初杂剧自喻性书写颇具规模,既呈现出杂剧自身发展规律,也是明遗民的一部心态史。其中蕴含着文人们易代之际的情感体验,具有鲜明的时代风貌。因此,明末清初杂
光正交码具有良好的自相关性与互相关性,被广泛应用在码分多址（CDMA）系统中,是码分多址光纤信道的一种专用码.码分多址技术起源于第二次世界大战,因其能很好的防止敌方通讯干扰,在军事方面发挥着重要作用.并且由于码分多址技术的高抗干扰性和提高系统容量等多种优点,卫星通讯和移动通讯领域也发挥着重要作用.随着用户增多,码分多址技术的缺点—带宽有限,成为阻碍其进一步发展的主要因素.随着时间的发展,光码分多址
李星沅是清朝嘉道年间的朝廷重臣,经世思想的倡导者,曾赴任八州,官至总督。为官期间,在政治、经济、军事等方面都颇有建树,地方治理举措大利民生。李星沅宦游二十余载,丰富的人生经历与交游网络影响着他的人生态度与为官方略,对其文学创作与诗学思想也在潜移默化中产生影响。李星沅一生笔耕不辍,著述颇丰,有《李文恭公遗集》《李星沅日记》等传世。其中,存诗七百余首,这些诗歌在内容倾向与艺术特质等方面都有其独特魅力,
伴随着人类学民族志理论进入中国文学领域,中国文学呈现了书写与研究的人类学转向。进入新世纪,发扬各种理论话语的互补优势,建构真正多元对话的文学人类学,促进文学研究范式的变革,成为摆在中国学者面前的重要理论课题。2000年以来内蒙古短篇小说的书写,伴随着时代与社会的变迁,展现了内蒙古这一多民族聚居地丰富的地域色彩与民族风格,并且在强化内蒙古文学民族性和地域性特征的同时,具有了人类学领域中民族志的特质。
HPS是History of science、Philosophy of science、Sociology of science首字母的缩写,HPS教育是在教学过程中渗透科学史、科学哲学和科学社会学的相关内容来解读和理解科学,已有大量在各科中利用科学史践行教学的研究。面临信息爆炸时代,社会发展的需要、培养新时代接班人和建设者学生个人发展的需要及课程改革的需要,培养学生批判性思维势在必行。通过文献
目的:老年人群慢性疼痛患病率高,临床上治疗困难,严重影响了老年人的生活质量,并给家庭和社会带来了沉重的负担。探索老年人群痛觉敏化机制以及安全有效的慢性疼痛治疗方法是重要的临床课题。本研究着眼于老年大鼠与成年大鼠背根神经节（Dorsal Root Ganglia,DRG）中长链非编码RNA（Long Noncoding RNA,Lnc RNA）的表达差异,寻找与老年痛觉敏化相关的Lnc RNA,并探
目的 探究天津中医药大学第一附属医院中药结肠透析方（大黄、牡蛎、蒲公英）治疗慢性肾脏病（CKD）的作用机制。方法 使用BATMAN-TCM收集大黄、牡蛎、蒲公英三味中药的化学成分和相关靶点，在DisGeNet、DrugBank等数据库检索CKD疾病靶点。选用Venny数据库获取药物-疾病交集靶点后，将其导入STRING数据库并利用Cytoscape3.9.1软件进行可视化；在DAVID数据库对交集
量子霍尔效应的发现不仅引起了凝聚态物理学领域科研工作者浓厚的兴趣,同时也将数学中的“拓扑”概念引入到了物理学研究中。凝聚态拓扑现象首先发现于电子系统中,近年来,随着拓扑能带理论的诞生和发展,通过与电子类比,拓扑现象在光子晶体、声子晶体等人工微结构复合材料中的研究也得到突破性的进展,理论预言的边界态输运表现为完全背散射抑制、无损和单向传输的性质也得到了实验证实,这使其存在着巨大的应用潜力。磁振子晶体