绿球藻胞外多糖的提取和体外活性研究

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多糖是一种广泛存在于生物界中的高分子聚合物,目前对于绿球藻多糖的研究更倾向于胞内多糖的研究,而绿球藻胞外多糖的研究较少,本研究选用绿球藻上清液进行试验,进行绿球藻胞外多糖的提取、组分测定、抗氧化指标、体外模拟消化试验、离体兔十二指肠试验和体外细胞试验,为后续绿球藻胞外多糖在保健品、化妆品等方面的产业研发提供理论依据。主要研究内容如下:对绿球藻上清液经浓缩和纯化得到的绿球藻胞外多糖进行测定,通过苯酚硫酸法可知提取得到的绿球藻胞外多糖的总糖含量为8.036 mg/L,纯度为80.000%;通过高效凝胶渗透色谱法可知绿球藻胞外多糖由四个均一对称的峰组成,各个范围内多糖的分散系数均小于2,分布较均匀;通过高效液相色谱峰可知绿球藻胞外多糖的D-甘露糖:葡萄糖醛酸:葡萄糖:半乳糖的摩尔百分比为48.75:15:11.25:25。绿球藻胞外多糖对DPPH、ABTS+、羟基自由基具有相应的清除能力,当绿球藻胞外多糖在浓度为1.00 mg/m L时清除能力分别为54.740%、42.400%、42.980%。绿球藻胞外多糖在浓度为1.00 mg/m L时对铜绿假单孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为28.000%、30.000%、12.000%、14.000%。通过体外模拟消化实验发现绿球藻胞外多糖在胃液中可以被分解,在肠液中的分解效果弱于胃液。试验发现绿球藻胞外多糖对离体兔十二指肠具有促进肠管收缩作用,样品浓度在1.00 mg/m L时对离体兔十二指肠的促收缩作用达到177.000%,在加入组胺、卡巴克、氯化钡促收缩药物作用后,样品对离体兔十二指肠的收缩有抑制作用,样品浓度分别在0.05 mg/m L、0.05 mg/m L、1.00 mg/m L时对组胺、卡巴克、氯化钡的促收缩抑制最好。通过细胞活性检测试验表明绿球藻胞外多糖对免疫细胞的分化、生长具有促进作用,样品对经脂多糖和刀豆蛋白A处理的小鼠原代脾细胞具有促生长作用,其促进作用与浓度成正比;对腹腔巨噬细胞具有一定的促生长作用,降低其NO的生成,提高吞噬活性;对VERO细胞没有毒害作用,通过设定过氧化氢不同浓度以及作用时间得到最佳的半数氧化损伤条件选取0.015%作用1.0h进行实验,结果表明,不论先后加入过氧化氢,样品都可以减少过氧化氢对VERO细胞的氧化损伤。
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