【摘 要】
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人源蛋白质酪氨酸磷酸酶PTP-PEST由PTPN12基因编码,其表达或者活性的异常与多种疾病密切相关。但关于PTP-PEST功能及PTP-PEST对恶性肿瘤的发生发展,特别是对宫颈癌的研究报道仍相当有限。本研究应用课题组前期构建的PX458-PTPN12-sg RNA1和PX459-PTPN12-sg RNA2重组载体共转染HeLa细胞,经过筛选、鉴定后获得了PTPN12基因敲除的HeLa稳定细胞
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人源蛋白质酪氨酸磷酸酶PTP-PEST由PTPN12基因编码,其表达或者活性的异常与多种疾病密切相关。但关于PTP-PEST功能及PTP-PEST对恶性肿瘤的发生发展,特别是对宫颈癌的研究报道仍相当有限。本研究应用课题组前期构建的PX458-PTPN12-sg RNA1和PX459-PTPN12-sg RNA2重组载体共转染HeLa细胞,经过筛选、鉴定后获得了PTPN12基因敲除的HeLa稳定细胞株。我们采用悬滴实验,观察敲除PTPN12基因对HeLa细胞间相互作用的影响,结果表明,与野生型细胞相比,PTP-PEST的缺失减弱了细胞间粘附性,并对细胞的增殖有一定的促进作用;吉姆萨染色结果显示,PTP-PEST的缺失使得处于分裂期的HeLa细胞数量显著增加;我们采用流式细胞术对细胞周期进行分析,发现PTP-PEST缺失的HeLa细胞株处于S期的细胞数量显著增加,表明PTPN12基因的敲除促进了细胞的体外增殖;通过细胞划痕和Transwell细胞侵袭实验,我们发现PTP-PEST缺失的HeLa细胞的迁移能力和侵袭能力显著增强;软琼脂克隆形成实验结果表明,PTP-PEST的缺失对HeLa细胞的克隆形成能力无显著影响;小鼠荷瘤实验结果也显示,PTPN12基因敲除后的HeLa细胞的体内成瘤能力并没有显著提高;值得注意的是,与接种野生型HeLa细胞小鼠的脾脏相比,接种PTPN12基因敲除细胞的小鼠脾脏显著增大;通过HE染色发现,肿瘤组织内部无明显差异,但是PTPN12基因敲除细胞接种组的小鼠脾脏中多核巨细胞的数量显著增加,说明PTP-PEST缺失的HeLa细胞可能使小鼠炎症反应加重;最后应用Western Blot技术,我们发现PTP-PEST与p ERK、FAK和E-cadherin信号通路密切相关,提示PTP-PEST可能影响细胞粘附和细胞迁移的过程,后续还需要对肿瘤体内转移能力进行研究。综上所述,我们成功构建了PTPN12基因敲除的HeLa稳定细胞株,并对细胞株进行了表征。体外实验结果表明,PTP-PEST的缺失提高了HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭的能力,对克隆形成能力无显著影响,体内成瘤能力也未见明显差异。本研究初步揭示了PTP-PEST在HeLa细胞中的影响,为研究PTPPEST在肿瘤细胞中的生物功能,提供了一种有价值的细胞模型。
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